臂丛损伤再生中脊髓GAP-43、CGRP、GFAP表达和超微结构的改变.pdfVIP

臂丛损伤再生中脊髓GAP-43、CGRP、GFAP表达和超微结构的改变 表达和超微结构的改变 专业： 人体解剖与组织胚胎学 硕士生g 陈龙菊 指导教师：李峰教授 摘 要 近年来臂丛神经损伤的发病率呈逐年上升趋势，根据臂丛损伤部位不同可以 分为节前损伤和节后损伤，节前损伤是臂丛损伤中最为严重的一种，一旦损伤， 将无法进行修复，只能进行神经移位术，但由于神经移位手术操作复杂，且臂丛 神经损伤的性质和程度难以准确判断，因此治疗效果不尽人意。近年来神经损伤 复中的作用研究较多，但它们在中枢神经损伤和再生修复中的作用鲜见报道。此 外，神经元的死亡也是导致神经功能难以恢复的原因之一。已有研究表明新生鼠 神经损伤后脊髓运动神经元的死亡方式类似于凋亡的特点，而成年动物神经损伤 后运动神经元的死亡机制仍存在争议。 目的：本课题创立三种选择性臂丛损伤模型，主要是探讨臂丛损伤后 臂丛损伤导致运动神经元死亡的机制，为临床臂丛损伤的修复治疗提供理论和实 验依据。 方法：雄性sD大鼠98只，体重180～2209，随机分为对照组和实验组，后 者又分为三个损伤组：右C7前根撕脱组(A组)；右c7前根撕脱+同侧C5～T1 于免疫组化实验的大鼠术后存活ld，3d，7d14d；用于荧光定量RT—PCR和电镜 实验的大鼠术后存活14d。按照联合行为学评分方法(CBS)评价臂丛损伤引起 的神经功能缺失症状；采用荧光定量RT-PcR方法检测c7前角和c7前根中 臂丛损伤再生中脊髓GAP-43、CGRP、GFAIP表达和超徽结构的改变 蛋白的表达规律；通过透射电镜方法观察脊髓运动神经元的超微结构变化。所有 定量数据均计为均数±标准差(x±S)，以SPSSIO．0统计软件进行统计分析。 结果：(1)臂丛损伤后大鼠神经功能缺失症状：对照组CBS评价计分为0分， 损伤组各时间点CBS评分与对照组比较有显著性差异，但l～14dCBS评分呈下 降趋势。三个损伤组之间比较，A组计分较低、C组计分最高，B组居中，各组 之问存在显著性差异(尺0．01)。 GAP-43mP,NA表达明显上调而前根表达明显下降，三个损伤组之间比较，c组表达 量最高、B组最低，A组居中，三组间存在显著性差异(尺O．01)。对照组和损伤 组术后1d、3dC7前角未见GAP一43免疫阳性神经元，术后7d各损伤组C7前角 神经元数目比较，C组最多，B组最少，A组居中，各组之间存在显著性差异 (尺0．01)。 (3)臂丛损伤再生中CGRP表达变化：对照组和各损伤组c，前角均可见 对照组和各损伤组c7后角的浅层可见CGRP免疫阳性神经纤维。A、B、C三组术 后1～14dcGRP表达呈下降趋势，至术后14dCGRP表达显著低于术后1d。术后 终低于对照组(尺O．01)。三个损伤组组间比较有显著性差异(PO．01)，其中A组 CGRP表达量最高，B组最低，C组居中(P(O．01)。 (4)臂丛损伤再生中GFAP蛋白表达变化：对照组和损伤组c7脊髓灰质和 白质中均可见GFAP免疫阳性的星形胶质细胞(AS)。术后l～14d，各损伤组As 呈进行性增加趋势，且显著高于对照组(PO．01)。术后l～14d各损伤组组间比 较，A组GFAP表达最低，C组表达最高，B组居中，各损伤组组问比较存在显 Ⅱ 臂丛损伤再生中脊髓GAP．．43、CC．RP、GFAP表达和超微结构的改变 著性差异(P0．05)。 (5)臂丛损伤诱导脊髓运动神经元的超微结构改变：三种臂丛损伤组c7前 角均可见呈凋亡特征性改变：运动神经元内核染色质聚集靠边，核固缩、碎裂、 核膜皱褶并内陷，并有染色质团块形成的凋亡小体。细胞体积缩小，胞浆内细胞 器密集，线粒体轻度肿胀，核周粗面内质网减少，游离核糖体增多，胞浆内可见 较多的空泡。神经元胞体周围的有髓神经纤维和无髓神经纤维呈轻度肿胀，髓鞘 的板层结构消失。 结论：(1)选择性臂丛损伤导致动物不同的神经功能缺失症状。去臂丛单一 运动根不引起运动受限；去臂丛运动根和感觉根可致前肢运动感觉障碍：去臂丛 运动根的皮质下行纤维可致动物前、后肢严重瘫痪。 性神经元，术后7d开始出现。14d达高峰，提示GAP一43不是