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预防污染应注意以下几方面RNA
2) 胰蛋白酶处理法 确定细胞数量 吸除培养基 用PBS洗涤细胞 吸除PBS 向
注意事项 ： ， ， ， ，
细胞中加入含有0.1-0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞 当细胞脱离容器壁时 加
， ，
匀浆后 加氯仿前 样品可在 ℃放置一个月以上
， ， -70 ；
入含有血清的培养基失活胰蛋白酶 将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中
， ，
沉淀可以保存在 酒精中 ℃一个星期以上或 ℃一年
RNA 75% ，2-8 -20 。 × 离心 收集细胞沉淀 仔细吸除所有上清
300 g 5 min， ， 。
注意 收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净 否则会导致裂解不完全 造成
预防RNase污染 应注意以下几方面 ： ， ，
，
RNA的产量降低。
1. 经常更换新手套 因为皮肤经常带有细菌 可能导致RNase污染 6 7 7
。 ， 。 细胞悬液 离心取细胞 每 × 动物 植物和酵母细胞或每 细菌细胞加入
d. ： 。 5 10 - 10 、 10
2. 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。 1 ml TRNzol 加入TRNzol前不要洗涤细胞 以免降解mRNA 一些酵母和细菌细胞
。 ， 。
3. RNA在TRNzol试剂中时不会被RNase降解 但提取后继续处理过程中应使用不含RNase
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