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转染rnf6 基因对肝癌细胞irs-2 表达的影响 - 生物技术通报
生物技术通报
·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期
2014 6
转染 RNF6 基因对肝癌细胞 IRS-2 表达的影响
巩健 宋健
（淄博职业学院制药与生物工程系，淄博 255314）
摘 要 ： 构建环指蛋白6 （RNF6 ）真核表达载体，并探讨其对胰岛素受体底物1 （IRS-2 ）表达的影响。以人cDNA 为模板，
PCR 扩增RNF6 全长编码基因，并将其克隆至载体pcDNA3.1-CHA 中，将重组质粒转染肝癌细胞株HepG2 ，利用Real time-PCR、
Western blot 检测细胞内IRS-2 mRNA 水平及蛋白表达情况。携带RNF6 目的基因的质粒转染HepG2 细胞48 h 后IRS-2 的mRNA 表
达降低，为对照组的37% ，显著低于对照组，差异有统计学意义 （ 0.0 1 ）。 RNF6 引起IRS-2 的表达下调，这一过程可能由于泛
P
素化导致胰岛素信号转导通路障碍。
关键词 ： 胰岛素受体底物-2 泛素化 环指蛋白6 胰岛素
Effect of Gene Ring Finger Protein 6 on the Expression of Insulin
-
Receptor Substrate 2 in Hepatoma Cells
Gong Jian Song Jian
（Dep artment of Pharmaceutical and Biological Engineering ，Zibo Vocational Institute ，Zibo 255314 ）
Abstract: It was to construct an eukaryotic expression vector of ring finger protein 6 （RNF6 ）gene and investigate the effect of
RNF6 on the expression of insulin receptor substrate-2 （IRS-2 ）. The coding sequence of hRNF6 gene was amplified by PCR with human
cDNA as template. The pcDNA3.1-CHA-RNF6 was constructed and transfected into hepatocarcinoma cells （HepG2 ）by routine mole
cular biology technology. The total RNA was extracted from HepG2 cells 72 hours post-transfection, the expression levels of IRS-2 was
detected by real-time quantitative PCR. Western blotting was applied to detect the protein levels of IRS-2. Result showed that the mRNA
level of IRS-2 gen
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