活性污泥羟氨氧化还原酶粗酶提取及活性测定方法的 - 环境科学学报.pdf

第 ３５ 卷第 １２ 期 环　 境　 科　 学　 学　 报 Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１２ ２０１５年１２月 　Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ Ｄｅｃ．，２０１５ ＤＯＩ：１０．１３６７１／ｊ．ｈｊｋｘｘｂ．２０１４．０１０７ 何志仙，魏旖旎，刘婧晶，等．２０１５．活性污泥羟氨氧化还原酶粗酶提取及活性测定方法的优化研究［Ｊ］．环境科学学报，３５（１２）：３７９７⁃３８０４ Ｈｅ Ｚ Ｘ，Ｗｅｉ Ｙ Ｎ，Ｌｉｕ Ｊ Ｊ，ｅｔ ａｌ．２０１５．Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｒｕｄｅｈｙｄｒｏｘｙｌａｍｉｎｅｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｒｏｍ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｓｌｕｄｇｅａｎｄ ｉｔｓａｃｔｉｖｉｔｙ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ，３５（１２）：３７９７⁃３８０４ 活性污泥羟氨氧化还原酶粗酶提取及活性测定方法 的优化研究 １，２ ２ ２ ２，∗ 何志仙 ，魏旖旎 ，刘婧晶 ，袁林江 １． 西安建筑科技大学理学院，西安７１００５５ ２． 环境与市政工程学院，西安７１００５５ 收稿日期：２０１５⁃０１⁃１０　 　 　 修回日期：２０１５⁃０３⁃２１　 　 　 录用日期：２０１５⁃０３⁃２１ 摘要：污水生物脱氮过程中Ｎ Ｏ的产生与活性污泥中细菌的羟氨氧化还原酶（Ｈｙｄｒｏｘｙｌａｍｉｎｅ ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＨＡＯ）活性有着密切关系．但目前 ２ 活性污泥中细菌的ＨＡＯ提取和活性测定方法尚未建立．本文首先探索了在２５℃、酶活性反应液电子受体供体配比１∶１和终止剂选用２ ｍｏｌ·Ｌ－１ ＨＣｌ条件下超声或高压破碎细胞法对ＨＡＯ粗酶活性的影响，结果表明高压破碎比超声破碎获取的粗酶活性高（ｐ＜０．０１）．在此基础上，我们进 一步优化了高压破碎下压力大小、破碎次数和裂解液用量的参数．粗酶提取液中ＤＮＡ含量、酶活力及酶比活力结果进行多因素方差分析表明 压力大小（５０、１１０或１６０ＭＰａ）、破碎次数（１、２或３次）和裂解液用量（２、５或１０ｍＬ）均对脱氮活性污泥破碎效果、酶活性和比活力有显著影响 （ｐ＜０．０１）；综合ＤＮＡ含量、酶活力及酶比活力结果看，１１０ ＭＰａ压力条件下，加５ ｍＬ裂解液破碎２次更适合污水生物处理中ＨＡＯ 的提取和活 性测定，既节省时间，又能较好的保持酶活性． 关键词：Ｎ Ｏ；生物脱氮；羟氨氧化还原酶；粗酶提取；活性测定 ２ 文章编号：０２５３⁃２４６８（２０１５）１２⁃３７９７⁃０８　 　 　 中图分类号：Ｘ７０３　 　 　 文献标识码：Ａ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｒｕｄｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｍｉｎｅ ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｓｌｕｄｇｅ ａｎｄ ｉｔｓ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ １，２ ２ ２ ２，∗ ＨＥ Ｚｈｉｘｉａｎ ，ＷＥＩ Ｙｉｎｉ ，ＬＩＵＪｉｎｇｊｉｎｇ ，ＹＵＡＮ Ｌｉｎｊｉａｎｇ １． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｘｉ′ａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉ′ａｎ７１００５５ ２． Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｘｉ′ａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉ′ａｎ７１００５５ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ １０ Ｊａｎｕａｒｙ ２０１５；　 　 　 ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎ ｒｅｖｉｓｅｄ ｆｏｒｍ２１Ｍａｒｃｈ ２０１５；　 　 　 ａｃｃｅｐｔｅｄ ２１Ｍａｒｃｈ ２０１５ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｎ Ｏｄｕｒｉｎｇｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｎｉｔｒｏｇｅｎｒｅｍｏｖａｌ ｉｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ