单细胞激光拉曼光谱检测重组大肠杆菌细胞表达甲酸脱氢酶.pdf

第 40 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究 第期 2012 年月 Chinese Journal of Analytical Chemistry ~ : / DOI 10.3724SP.J.1096.2012.20585 单细胞激光拉曼光谱检测 重组大肠杆菌细胞表达甲酸脱氢酶 1,2 1,2 2,3 1 * 1,2 * 1 卢明倩 温顺华 董 蓉 张 韦 黄庶识 陈丽梅 1 ( ) 昆明理工大学生物工程技术研究中心, 昆明 650500 2 , 3 , ) (广西科学院生物物理实验室 南宁 530007) (广西师范大学生命科学院 桂林 54 1004 , , 摘 要 甲酸脱氢酶(FDH EC )在工业生产中有重要的应用价值 工业上应用的FDH 可以通过构建高水 , , 平表达重组 FDH 蛋白的基因工程菌生产 用分子生物学的方法检测重组蛋白的高效表达和积累操作繁杂 耗 。 , 时耗力且需要破碎细胞 为了寻找一种简单快速 不需破碎细胞, 且能实时检测 FDH 重组蛋白在基因工程菌 , ( ), 中表达情况的方法 本研究应用单细胞激光拉曼光谱分析技术 LTRS 研究 IPTG 诱导不同时间后甲酸脱氢 ( ) 。 , , , - 1 酶重组蛋白 FDH 在大肠杆菌细胞中的表达水平 结果表明 FDH 的特征峰 1004 1355 1455 和 1667 cm 随着 , , IPTG 诱导时间的延长而增强 说明在诱导培养过程中FDH 重组蛋白在重组大肠杆菌细胞中表达并积累 这 。 , 4 个峰强的增加值所反映的FDH 表达量与 SDS PAGE 电泳分析结果一致 实验结果证明 LTRS 是快速有效 - 检测单个大肠杆菌活细胞体内重组 FDH 实时表达的一种非入侵方法。 ; ; ; ; 关键词 大肠杆菌 甲酸脱氢酶 重组蛋白表达 单细胞 拉曼光谱 引 言 1