转基因作物中2 种除草剂抗性基因aad1 和dmo的pcr 检测方法.pdf

－ 生物安全学报 ２０１４ꎬ２３(４):２７８ ２８３ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＢＩＯＳＡＦＥＴＹ ｈｔｔｐ:∥ｗｗｗ.ｊｂｓｃｎ.ｏｒｇ ＤＯＩ:１０.３９６９/ ｊ.ｉｓｓｎ.２０９５￣１７８７.２０１４.０４.００９ 转基因作物中２种除草剂抗性基因 ａａｄ１和ｄｍｏ 的ＰＣＲ检测方法 １ ２ ２ １ １∗ 龙丽坤 ꎬ韩　 月 ꎬ杨丹丹 ꎬ闫　 伟 ꎬ李飞武 １吉林省农业科学院农业生物技术研究所ꎬ吉林 长春 １３００３３ꎻ ２哈尔滨师范大学生命科学与技术学院ꎬ黑龙江哈尔滨 １５００２５ 摘要:【背景】抗除草剂转基因作物是全球种植面积最大的一类转基因植物ꎬ以除草剂抗性基因作为检测靶标的分子鉴定 方法的研究与应用ꎬ对转基因生物安全的检测与监测有重要意义ꎮ 【方法】根据除草剂抗性基因ａａｄ１和ｄｍｏ 的核苷酸序列 设计ＰＣＲ检测引物ꎬ并进行ＰＣＲ反应体系优化、方法特异性、灵敏度、再现性等方面的测试ꎬ分别建立ａａｄ１基因和ｄｍｏ基 因的特异性ＰＣＲ检测方法ꎮ 【结果】建立的ＰＣＲ检测方法在５６~６４ ℃的退火温度范围内均能获得一致性结果ꎬ具有良好 的稳健性ꎮ 该方法可将含有ａａｄ１基因和ｄｍｏ基因的转基因作物与其他转基因作物区分开ꎬ其灵敏度可分别达到２０个拷 贝和４０个拷贝ꎮ 通过将ａａｄ１基因和ｄｍｏ基因的检测引物放入同一管ＰＣＲ反应体系中ꎬ还能在一次ＰＣＲ 中同时检测这２ 个靶标基因ꎬ双重ＰＣＲ的检测灵敏度与单一ＰＣＲ一致ꎮ 【结论与意义】建立的分子方法可精准检测出含有ａａｄ１基因和 ｄｍｏ基因的转基因作物ꎬ具有特异性强、灵敏度高的特点ꎬ为抗除草剂转基因作物的筛选检测提供了可靠的技术支撑ꎮ 关键词:转基因生物ꎻ除草剂抗性基因ꎻ分子检测ꎻＰＣＲ方法 Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｈｅｒｂｉｃｉｄｅ￣ｔｏｌｅｒａｎｔ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｃｒｏｐｓ １ ２ ２ １ １∗ Ｌｉ￣ｋｕｎ ＬＯＮＧ ꎬＹｕｅ ＨＡＮ ꎬＤａｎ￣ｄａｎ ＹＡＮＧ ꎬＷｅｉ ＹＡＮ ꎬＦｅｉ￣ｗｕ ＬＩ １Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＪｉｌｉｎＡｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＣｈａｎｇｃｈｕｎ Ｊｉｌｉｎ １３００３３ꎬＣｈｉｎａꎻ ２Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＨａｒｂｉｎＮｏｒｍａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＨａｒｂｉｎꎬＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ １５００２５ꎬＣｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ:【Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ】Ｈｅｒｂｉｃｉｄｅ￣ｔｏｌｅｒａｎｔ ＧＭｃｒｏｐｓａｓａｃｌａｓｓｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｐｒｏｄｕｃｅｔｈｅｇｌｏｂａｌｌａｒｇｅｓｔ ａｃｒｅａｇｅｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｃｒｏｐｓ. Ｆｏｒ ｔｅｓｔｉｎｇ ａｎｄ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｆ ＧＭＯ ｓａｆｅｔｙꎬｉｔ ｉｓ ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｅｓｔｉｎｇ ｈｅｒｂｉｃｉｄｅ ｔｏｌｅｒａｎｔ ｇｅｎｅｓ. 【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｔｏｌｅｒｅｎｔ ｏｆ ｈｅｒｂｉｃｉｄｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ