荧光光谱之一 - 北京大学单分子与纳米生物学实验室.pdf

荧光实验技术 及应用 荧光实验技术及应用 一基本概念 二荧光参数 三荧光仪器 四仪器技术 五实验考虑（影响荧光测量的因素） 六荧光技术在生物学、医学研究中的应用 一基本概念 （一）引言 荧光 1 发光 磷光 化学发光 摩擦发光 电发光 阴极发光 热致发光 等等 一基本概念 2 历史 1575：N.Monardes Lignum Nephriticum 1852年Stokes阐明了荧光发射的机制。荧石（fluospar) 1880：Liebeman最早提出“荧光与化学结构关系”, 的经验法则 为荧光技术的开发应用拉开了序幕 20世纪以来：对荧光进行了广泛而深入地研究 紫外荧光，可见荧光，x光荧光，红外荧光 （二）荧光的产生 1 分子的能量状态 在光学分析中涉及的分子能量有： Eo=Ee+ Ev + Er Ee：价电子运动能, electron Ev：原子在平衡位置附近的振动,vibration Er：分子绕其重心的转动能, rotation 其中，ΔEe ΔEv ΔEr 每个分子具有一系列严格分立的能级。 光是一种电磁波，光进入物质后发生两种情况 1. 能量几乎不被吸收 2. 能量被全部或部分吸收，光能被转移给分子。 吸收具有高度专一性。 2 分子的能级Energy Levels与跃迁Transition （三）荧光光谱 光谱：玻尔兹曼分布 （三）荧光与分子结构的关系 1 1880年Liebeman最早提出了关于荧光与和化学结构关 系的经验法则。 2 产生荧光的条件： A 物质分子必须具有吸收的结构，即生色团 B 该分子必须具有一定的量子产率和适宜的环境。荧光团 3 判断化合物能否发荧光，常从以下方面分析 （1）碳原子骨架： 分子具有共轭双键体系，大多含有芳香环或杂环 任何有利于提高π电子共轭度的结构改变，都将提高 荧光效率；或使荧光波长向长波方向移动。 例如：对苯基化，间苯基化以及乙烯化等。 化合物 荧光效率 荧光波长 联苯 0.18 316 4-乙烯基联苯 0.61 333 蒽 0.36 402 9-乙烯基蒽 0.76 432 乙烯化作用对荧光效率以及荧光波长的影响 （2 ）分子的几何排布： 具有刚性平面结构 HO O OH