三种提取hmg染色体非组蛋白方法的比较 - 遗传.pdf

See discussions, stats, and author profiles for this publication at: /publication/276847701 Comparison of Three Purification Methods of Chromosomal Non- Histone HMG Proteins. Article in ereditas (Beijing) · January 1987 CITATIONS READS 0 15 1 author: Qing-Rong Liu National Institute on Aging 167 PUBLICATIONS 6,422 CITATIONS SEE PROFILE Some of the authors of this publication are also working on these related projects: Diabetes and Alzheimers Disease View project Cannabinoid Receptor 2 View project All content following this page was uploaded by Qing-Rong Liu on 18 May 2015. The user has requested enhancement of the downloaded file. 遗传 HEREDITAS (Beijing) 9(1);39-421987 技 术 与 三种提取HMG染色体非组蛋白方法的比较’‘ 方 法 刘庆榕 吴鹤龄 北（京大学生物系） 非组蛋白是在染色体中组蛋白以外的蛋白 仪器 高速禽心机 B（eckmanJA-21); 质。它除了含有基因的调控蛋白外，还具有许 氨基酸分析仪 B（eckman121MB);BS-423稳 多与核酸代谢有关的酶和结构蛋白。非组蛋白 压稳流电泳仪 北（京生化仪器厂）；控温多用高 从染色体复合物上分离下来后，很容易聚集在 速组织捣碎器 江（苏江阴科学仪器厂）。 一起，也很容易被蛋白水解酶降解。所以，它们 试剂 PMSF(Merk)；考马斯亮蓝 R- 很难在溶液中保持原状31〔。目前，非组蛋白中能 250,fl-琉基乙醇(Fluka)。本实验中所用其它 够较好地分离、纯化，并对其生物学性质及结构 试剂均为国产，分析纯。 功能加以详细研究的是一组称为高泳动因子的 胸腺组织染色质的制备 小牛胸腺或猪 染色体非组蛋白，简称HMG染色体非组蛋白。 胸腺300克绞碎，加到1,500ml0.075MNaCl- HMG蛋白质分子量较低 M（W30,000)，可 0.025MEDTA-0.5mMPMSF(PH7.5)溶液中， 以用稀盐溶液或高氯酸从细胞核提取，并能溶 刀匀浆器全速匀浆2分钟，用斗层纱布过滤匀 于2沁三氯乙酸溶液中。HMG蛋白质主要含 浆液，除去结缔组织。滤液2,000g离心30分 有4种主要成份： HMGHMG2,HMGl4和 钟，沉淀加到350ml上述NaCI/EDTA溶液中， HMG,,,HMG蛋白质与组蛋白有相似之处，它 刀匀浆器全速匀浆 1分钟，匀浆液2,000g离心 们的碱性氨基酸残基的含量很高 2（5-30多）； 20分钟。沉淀加到300mlNaCI/EDTA溶液中 与组蛋白不同的是它们的酸性氨基酸残基的含 匀浆30秒钟，匀浆液2,000g离心15分钟，收 量也很高 （20-30务）。碱性和酸性氨基酸的 集沉淀。以上匀浆一离心步骤再重复 1次，得 含量加在一起占HMG蛋白质氨基酸含量的一 到洗净的染色质[410 半左右5,‘11,13]C 目前关于HMG蛋白质的功能和作用争论 实 验 方 法 很多。过