结核分枝杆菌的株水平鉴定和基因分型技术研究进展.pdf

·2 16 · 中 国呼吸 与危 重监护 杂志 20 10 年 3 月第 9 卷第 2 期 Chin J Respir Crit Care Med, March 20 10 , V ol. 9, No. 2 · 综 述 · 结核分枝杆菌的株水平鉴定和基因分型技术研究进展 黄丽萍 石荔 西藏 自治区人 民医院( 西藏拉 萨 850000) 随着结核病防治研究的不断深入, 人们发现细胞水平时 Southern 杂交, 较为烦琐; 三是杂交 带识读 困难; 四是 实验 中 代结核病流行病学的两大 问题———传播途径和传染源, 是了 需大量的结核分枝杆菌 DNA, 要对采集 临床标本做细 菌培 解得不够确切、不够深 刻的, 从传染 与发病 的关 系上 鉴定外 养, 实验时间较长 。 源性再感染, 用噬菌体分型毫无实际价值 。而常规细菌培养 ( 2) 其他重复序列: 针对 IS6110 标 准方法存在 的问题, 法进行耐药性监测作为流行病学调查方式之一, 只能了解其 人们在此基础上又逐步研 制开发 出一些新的插入序列或重 耐药的表型状况, 难 以探讨其 内在机制。随着分子生物学的 复序列替代 IS6110 作 为分 型的标志, 对 标 准检 测技术起到 飞速发展, 1980 年 以后, 逐步建立 了一些根据 核酸序 列进行 了很好的补充作用[ 2] 。如牛型结核分枝杆菌用上述 方法不 菌株鉴定的高度特异的基因分 型方法, 主要包括: 限制性片 能区分, 就换用了一种新的插入序列 IS1081; 另外, 还建立起 段长度多态 性、DNA 指 纹 图谱分析、脉冲场凝胶 电泳、PCR 以 DR 序列( 短 的重 复序 列) 和 PGRs ( 多态性富含 GC 的重 酶切分型、随机扩增多态性 DNA、DNA 序列分析 以及基因芯 复序列) 为遗传标志的分型方法, 用于在 IS6 110 拷贝数较少 片技术等等 。结合现代分子生物信息学技术, 使结核分枝杆 的情况下结核分枝杆菌的分型。 菌的菌株分型进入 了一个全新的领域———株水平 的鉴定, 也 2. 脉冲场凝胶电泳( PFGE) 分 型: 这种 方法是用低 熔点 进而使结核病分子流行病学的研究取得 了很 大的进展 。许 琼脂糖包埋细菌, 经 SDS 和蛋白酶 K 裂解 和消化后, 再利用 多研究者在结核病 的流行病学研究中, 把群体研究与个体研 限制位点较少的内切酶消化, 经脉冲场凝胶 电泳, EB 染色, 究、宏观研 究 与微 观研 究 结合 起来, 研 究 结 核分 枝 杆 菌 可在一块凝胶上显示全染色体 DNA 的酶切 片段 。用 PFGE ( Mycobacterium tuberculosis, MTB) 的分子结构上的差异, 结合 方法进行分型, 只产生少量大 的染色体限制 性片段, 带 型不 病例流行病学资料, 以阐明结核病 的流行病 学 问题, 形成了 太复杂, 易于识别, 而且还不需要特异性探针, 避免了放射性 结核病分子流行病学。分子 分型技 术是结核病 分子流行病 污染。据报道, 其辨别能力与 IS6110 标 准方法 无 明显差异, 学研究的重要手段之一。对 受感染个体的菌株进行分子分 主要用于 IS6110 拷 贝数较 少 的情 况 下结核分枝杆 菌的分 型在追踪传染源方面起重要作用 。 型, 并 已在结核暴发调查的传染源追踪及传播途径的确定方 一、技术方法 面起到了重要的作用[ 3] 。但是, 这种方法难于检测小的遗传 1. DNA 指 纹图谱方法: 它是采用 限制 性片段长度多态 变化, 而且需要特殊的仪器, 限制 了它在结核杆菌菌株 鉴定 性( restriction fragmen