人发蛋白质的快速提取方法.pdf

2009年第3期 l||，f丝调 5 人发蛋白质的快速提取方法 苟明霞 编译 ，杨旭红 校 (苏州大学纺织与服装工程学院，江苏苏州 215021) 摘 要：发现一种简便快捷 的从头发中提取蛋 白质 的方法 ，可 以更方便地检测头发蛋 白的生物化学性能。这种提 取过程原理是在还原剂存在的条件下，硫脲和尿素的结合能有效地提取出头发皮层部分的蛋白质。提取出的蛋 白 质主要是 由分子量为40~60kDa的硬 a一角蛋 白、分子量为 12～18kDa的基质蛋 白、以及少量的分子量为 110～ 115kDa和 125～135kDa的蛋 白质。此法对羊毛、鸡毛、鼠毛和人类指甲的开发利用也非常有效。 关键词 ：人发蛋 白质 ；提取方法 ；角蛋 白 具有角蛋 白结构的动物毛、指 甲、角、羽毛中的 大方法”。这种方法也可用于从羊毛、鸡毛、鼠毛 、人 蛋白质含量大约 占整个物质的 80 。人类头发蛋 类指甲中提取蛋 白质组分 。 白质是由两大部分组成，一种是由硬 a一角蛋 白形成 的微纤结构化的中间丝 ，另一种是 以基原蛋 白形成 1 材料和方法 的一种非丝状细菌基形成的中间丝结合蛋 白。硬 a一角蛋白可以进一步分成亚组分 ，由至少 4～9种不 1．1 人发蛋 白质的提取 同的工型酸性蛋 白质 (40～50kDa)和 4～6种 Ⅱ型 先用乙醇清洗试样 ，然后用三氯甲烷／甲醇 (2： 中性蛋白质 (55～65kDa)组成。基质蛋白质又分为 1，v／v)的混合液处理试样 24h，以除去头发外面的 高硫蛋 白(10～20kDa)和高酪氨酸蛋 白(6～9 油脂 ，将去完油脂的头发 (20mg)与含有25mmol／L kDa)。 三蒸 HC1，pH 8．5，2．6mol／L硫脲，5mo|／L尿素 已有许多关于分离硬 a一角蛋 白及其相关蛋 白 和 5 的2一巯基乙醇 (2一ME)的溶液(5mL)混合 (信 方法的报道 。在 自然状态下很难获得硬 a一角蛋 白， 大方法)，或者与 25mmol／L三蒸 HC1，pH 9．5，8 因为硬 a一角蛋 白由二硫键彼此交叉连接，使得 中间 mol／L尿素和 5 2一巯基乙醇的溶液混合 (传统方 丝与基原蛋 白交联。从角蛋白结构的物质中提取出 法)，在 5O℃下处理 1～3d。然后在室温下将这些 的蛋 白质可以在变性剂和 烷基存在，并在 PH 极 混合物过滤，并在 15000×g下离心 20min。得到 低或极高的条件下发生降解。这些混合试剂可以使 的上层清液即为头发蛋 白溶液，将溶液 中残杂用蒸 蛋白质发生水解 。其他的变性剂，像阴离子合成洗 馏水洗干净，作为提取的头发试样 。 涤剂和盐酸胍 ，也可用于蛋 白质的提取。但是蛋 白 1．2 提取蛋 白质 的测定 质溶液中的洗涤剂和降解的半胱氨酸对物理化学性 干重法 ： 能的分析有影响，并且很难将它们完全去除。为避 将提取的头发蛋 白溶液用蒸馏水透析 5～7次 ， 免上述问题，另外一种方法是从毛囊较低部分的细 冻冻干燥 ，然后在二氧化硅容器里干燥。相应地，将 胞中提取蛋白质。但是，用这种方法提取 出的蛋白 提取 的头发试样 (剩下 的残杂)用蒸馏水冲洗干净 ， 质量很少 ，不便分析，此外 ，这种方法获得 的蛋 白质 然后在二氧化硅容器里干燥 。用电子天平称出烘干 不是从完全成熟的角蛋白结构的物质中取得的。 的头发蛋白和头发残杂的重量。 本文介绍了一种新的、方便的提取蛋 白质的方 Bradford法 ： 法，它是在没有洗涤剂的条件下，从头