地鳖纤溶活性蛋白的纯化及性质研究purification and biochemi.pdf

维普资讯 22卷 4期 生 物 工 程 学 报 Vo1．22 No．4 2006年7月 ChineseJournalofBiotechnology July 2006 地鳖纤溶活性蛋 白的纯化及性质研究 Purification and BiochemicalCharacter ofaFibrinolytic Protein from Eupolyphagasinensis 韩雅莉 ，李张伟 HAN Ya—LiandLIZhang—Wei 1广东工业大学轻工化工学院生物工程系，广州 510090 2汕头大学理学院，汕头 515063 1GuangdongUniversityofTechnology，Guangzhou510090，Ch／na 2CollegeofScience，ShantouUniversity，Shantou515063，Ch／na 摘 要 通过硫酸铵分段沉淀、DEAE一纤维素柱和SephadexG-75柱层析从雌地鳖 (Eupolyphagesinensiswalker)体 内分 离纯化到 一 种相对分子质量约为41．3kD的纤溶活性蛋 白，纤维蛋 白平板测定表明，该蛋 白具有纤溶作用。经 SDS．PAGE电泳显示为一 条带，舍糖量为 10．5％。其水解纤维蛋白的比活力为 547．86u／mg。该成分受蛋 白抑制剂和丝氨酸蛋 白酶抑制剂 PMSF的抑 制，但 EDTA对其影响不大，提示该成分属于丝氨酸蛋 白酶类。该成分在4o℃下基本稳定，最适温度 4o℃，最适 pH为 8．0，其 激活纤维蛋 白溶解酶(PLG)的机制与尿激酶(UK)有一定区别。推测其可能是一种新的地鳖纤溶酶组分。 关键词 地鳖 ，纤溶活性蛋 白，分离纯化 ，性质 中图分类号 Q55 文献标识码 A 文章编号 1000．3061(2006}04．0639．05 Abstract A noveloffibrinolyticproteinhasbeenseparatedandpurifiedbyammomum sulfatefractionation，DEAE—cellulose andSephadexG一75Columnchromatographyfrom thetissueofthefemaleEupolyphagasinensisinthepaper．Theproteinshowed anapparentmolecularweightof41．3kD onsodium dodecylsuflate—polyacrylamidegelelectrophoresisanalysis．Inaddition，it includes10．5％ sugar．Itsspe cificactivitytohydrolyzefibrinwas547．86u／mg．Th eenzymeactivityWas inhibitedbyMg2 ． C ，protein inhibitors，such as 8mol／L ureaand 1％ p—mercaptoet．hanol，and serine protease inhibitorsuch as phenylmethanesuflonylfluoride(PMSF)，butWash’tinhibitedbyNa ，K andethylenediaminotetraaceticacid(EDTA)．The proteinWas stableunder40~C andit’Soptimal temperatureWas also40~C ．It’Soptimal pH was8．0．Itshowedadifferentway betweentheactivity