三氧化二砷逆转人乳腺癌细胞株MCF-7ADM阿霉素耐药及其相关机制的分析.pdfVIP

三氧化二砷逆转人乳腺癌细胞株MCF一7／ADM 阿霉素耐药岌萁福关机制的研究 硕士研究生： 王秀丽 指导教师： 孔 力 副教授 专业名称： 人体解剖与组织胚胎学 摘 要 侈药耐药性(multidrug 结构、功能及杀伤机制各异的化疗药物均产生耐受。合理的联合化疗 方案可因MDR的出现而不能最大限度的发挥其细胞毒作用，故阐明肿 瘤细胞MDR的发生机制，并寻求有效的具有临床应用价值的逆转药物， 即MDR的逆转问题已成为提高肿瘤化疗的关键。q 本研究以中药砒霜的有效成分三氧化二砷(As20，)来尝试逆转具 有多药耐药表型的人乳腺癌细胞株MCF．7／ADM对阿霉素 剂量为O．2“M，低毒剂量为0．8pM，而在O．2pM的非细胞毒性剂量下， 还能够不同程度的增加MCF一7／ADM的细胞内阿霉素浓度，与不加As，O， 的对照组比较有显著性差异(P0．05)。由此证明：As，O，可以增加细胞 内的化疗药物浓度，从而部分逆转耐药细胞株MCF一7，ADM对ADM的 耐药。 在上述实验的基础上，我们对As：0，实现其逆转作用的具体机制进 行了进一步研究。目前，对于MDR机制的研究已日趋深入，而且也建 立了较为完善的理论体系。其中较为重要的机制之一即是：谷胱甘肽S一 1．1 8，GSTs)活性的增高。GSTs s—transferases，EC2．5 转移酶(glutathione 是一个超基因家族的多功能蛋白质，其胞液形式可分为Ⅸ、n、“三类， 可参与肿瘤细胞耐药。一些I临床上重要的抗肿瘤药物可通过GSTs催化 与GSH结合以进一步代谢解毒，从而降低其原有的对肿瘤细胞的抑制 和(或)杀伤作用。另有文献报道：在一定的诱导条件下，耐药细胞 株MCF一7／ADM胞内GST一7c酶活性比亲代敏感株提高45倍，且在不接 触ADM的较长时间内仍能够保持其酶活性及耐药性的稳定。由此，为 了进一步明确As，O，对MCF．7／ADM细胞耐药的逆转机制，我们分别在 蛋白质水平和基因水平对逆转前后GST．7【的改变情况进行了实验观 察。当ADM的加药浓度为12．5pg／ml时，用生化方法测定GSTs的酶 的对照组酶活性为29．68±O．29(U／m1)，t检验分析，均差异显著 耐药株MCF一7／ADM的逆转作用可能是通过抑制GSTs的酶活性而实现 的，但该抑制作用并不随As，O，剂量的提高而增强。但是，我们并不能 就该结果明确有关GST．7c的具体改变情况，因为GSTs包括多种同工酶， 而且不同的同工酶在不同细胞株中的表达也不尽相同。所以，我们采 用免疫组织化学技术及其RT．PCR方法对GST．冗进行了特异性检测。 以GST一冗抗体检测其蛋白的表达情况，结果发现除有形态学改变外， 病理图像分析系统的半定量分析还表明：对照组(ADM=12．599／m1) 细胞MCF-7／S组为l 53．72-+3．59。统计学分析表明实验组与对照组均存 ．2． 组与敏感细胞组，宅t亦有显著差异。提示：As：O，可以部分降低耐药 GST一兀基因水平的表达情况，以D．actin作为表达内参，结果亦表明： 比较敏感细胞株，GST一兀mRNA在耐药细胞中呈过表达状态，而As：O， 者间具有差异性，两实验组间比较也表明了该作用的剂量依赖性。 综上所述，我们得出结论：非细胞毒性剂量的中药As：O，可以部分 逆转作用存在一定的剂量依赖性，即随着As，O，浓度的增高，细胞对化 疗药物ADM的敏感性也随之增强。探讨其具体的逆转机制可能是： (1)As：0：，直接与GST一Ⅱ酶分子活性中心的半胱氨酸巯基结合，从而 使酶活性受到直接抑制。(2)As，0，通过一定的分子机制改变GST一7【mRNA 的过表达状态，下调其表达水平，致使酶含量减少，从而间接抑制酶 活性。最终导致细胞解毒代谢能力的下降，细胞内化疗药物浓度增加， 对ADM的敏感性得以部分的恢复。 关键词：