中空异种骨缓释结构与重组人骨形成蛋白2成骨的实验分析.pdfVIP

中空异种骨缓释结构与重组入骨形成蛋白2 成骨的实验研究 硕士研究生：刘竟成 指导教师：杨彤教授 专业名称：药理学 摘 要 目的：骨缺损是临床一种常见的、且缺乏有效解决手段的严重问题，已成为 骨外科领域的重要研究课题。 humnbone 目前的研究表明重组人骨形成蛋白．2(recombiIlant molphogenetic pmtein一2，出BMP-2)具有诱导成骨的作用，可以用来促进骨折愈合，修复骨缺损。 但是单纯BMP被植入体内后，很快被扩散稀释或酶解吸收，难以在新骨形成的全 过程中充分发挥其诱导成骨作用，因此需要有合适的载体，在成骨过程中发挥支 架作用的同时使BMP得到缓慢释放。 本试验将胶原、明胶和去抗原异种骨联合应用。设计出中空结构异种骨、并 将胶原和明胶置于中孔内的复合载体，探讨其成骨活性优劣，与实心结构载体比 较，以选择、研制最佳载体。 材料和方法：材料主要有重组入骨形成蛋白一2(rllBMP_2)、I型胶原、明胶、 MEM培养基、碱性磷酸酶(ALP)体外临床试剂盒、异种骨、新西兰长耳大白兔等。 方法：①载体制作：异体骨松质骨部分加工制成直径8mm，长度5蚴的圆 柱体。其中一半骨中心打孔，内径3mm，制成中空骨。用表面离子活性剂超声充 分洗涤，脱去抗原。然后分别制备舳M口-2／胶原／明胶／中空异种骨(PGB)、妣MP-2／ 胶原／明胶／实心异种骨(SOB)和rhBMP一2／中空异种骨(PB)三种载体曲h但．2 复合体，动物实验各复合体中均含岫MP一2 300pg、胶原，明胶15mg，体外释放实 验各复合体中均含岫MP-2 50昭、胶原／明胶15mg。都以异种骨为空白对照。 ②体外释放试验：两种载体／rhBMP-2复合物：PGB、sGB和空白对照各时段 释放液(1小时、l天、2天、3天、6天和9天)分别刺激兔骨髓基质细胞，培养 后测定细胞ALP活性，比较其释放效应。 ③动物实验：选用15只新西兰大白兔，兔背竖脊肌内依次植入上述三组复合 体及空白对照共4组，8个样本。分别于2、4、3周后各处死5只，通过大体观察、 x光片、ALP活性检测、硬组织切片来探讨其成骨效应。 结果：①将资料用sPSSlO．O软件进行两因素方差分析处理，PGB、SGB组 较则没有显著性差异(F-2．079，P=o．096，P《0．05)。 ②动物实验中，(1)X光片显示术后2周时，pGB组外周显现片状高密度影， 中孔界限略微模糊，PB与之相似。sGB组仅见外周少许高密度影。中心部位无明 显变化：同样的情形也在术后4周被观察到，PGB组见大量高密度影遍布全片， 而中孔界限模糊；sGB组仅见外周片状高密度影，中心部位无明显变化，PB见散 在密度增高，中孔部位界限不清：而在术后8周，PGB组密度较4周有所下降， 边界模糊；SGB组则仅见外周片状高密度影，PB见中孔旁散在密度增高，外周界 限模糊： (2)病理切片见PGB组4周时和8周时骨代谢都很活跃，植入骨边缘呈锯齿状， 骨间充质细胞活跃，见大量成骨细胞环绕其外，另见破骨细胞，8周时在中心部位 见大量的毛细血管长入；而sGB组在4周时仅见少量成骨细胞层，8周时多见破 骨细胞，骨逐渐被降解，可见少量血管长入，在PB组4周时见破骨细胞活跃，却 少见成骨细胞，到8周时植入骨钙盐流失明显。 (3)ALP测定：术后两周和四周各组ALP活性用sPSslO，O软件双因素方差分 ALP活性最高，两周和四周时间段相比也有显著性差别(F=17．159，P=0．Ooo， PO．05)，四周ALP活性高于两周。 结论： 1．载体的空心结构有利于成骨，可使成骨从中心开始，成骨完全；相同剂量 舳MP．2与空心结构载体复合较实心结构成骨更多。 2．胶原明胶的加入更有利于成骨，相同结构的载体复合胶原后成骨更多，更