第二节转录.PPT

第二节 转录 三. 转录反应 四. RNA聚合酶 主要功能 识别与结合DNA上链上的启动子 沿着DNA双链作单向移动 边解开DNA双螺旋,边转录,然后再恢复正常的结构 同时能与局部解链的DNA链以及转录产物RNA链结合 按DNA模板选择正确的NTP底物,并以5‘-3’方向催化 磷酸二酯键形成,合成RNA链 识别转录的终止信号 能与转录因子相互作用,调节转录速度 能在转录受阻遏的情况下进行自身调整,借助辅助因 子,恢复和维持RNA合成 六. 转录过程 4. 转录的终止 七. 原核生物与真核生物基因转录的差异 RNA聚合酶的不同 转录产物的差别很大 真核生物转录产物需要进行剪接和修饰等转录后的加工成熟过程,而原核生物几乎不需要. 原核生物的转录产物mRNA为多顺反子,而大多数真核生物是单顺反子结构. 原核生物转录合成mRNA与蛋白的翻译相互偶联. * * 一. 概述 转录(transcription): 在DNA指导下的RNA合成. 转录调控因子 基本转录因子 底物 RNA聚合酶 转录开始部位 模板链 二. 特点 具有选择性,即只对基因组或者DNA分子中的编 码区进行转录. 2. 起始于DNA模板的一个特定起点,并在特定的终 点终止,此转录区域称为转录单位. 3. 由RNA聚合酶催化,且为DNA依赖酶. 4. 转录的起始由DNA上的启动子控制. 5. 被转录的DNA双链中只有其中一股模板链作为 RNA合成的模板. 6. 合成RNA的底物为4种5’-核糖核苷三磷酸. 7. 新合成的RNA链总是以5’- 3’方向延伸,与模板 DNA的方向反平行. 合成RNA的碱基种类 模板DNA RNA聚合酶 RNA合成反应(聚合) 磷酸 核苷 ※反应为5’-3’ ※不需要引物 ※ 5’端为三磷酸核糖核苷酸 ※DNA特定的部位被利用 ※模板链由RNA聚合酶的前进方向决定 Core enzyme Holo enzyme 亚基 基因 分子量 数目 所在 机能 α rpoA 40000 2 核心酶 聚合酶复合体的形成, 启动子的结合 β rpoB 155000 1 核心酶 催化核苷酸链聚合, 结合底物 β rpoC 160000 1 核心酶 DNA结合, σ因子结合 σ rpoD 32000- 92000 1 σ因子 启动子识别, 促进聚合酶完善 ω 9000 1 核心酶 未知 σ70通常基因的启动子 σ54固氮酶基因表达的启动子 σ32热休克应激蛋白的启动子 五. 转录的基本模式 5’ RNA Polymerase 移动方向 编码链 模板链 ３’ ○ ○ Rewinding point RNA binding site 合成RNA RNA?DNA hybrid 12 bp Unwinding point 解链区域18 bp 1. 模板链的识别（template recognition） RNA聚合酶与双链DNA的结合 σ factor Core enzyme Holo enzyme ＴＴＧＡＣＡ ＴＡＴＡＡＴ ＤＮＡ －３５ －１０ ＋1 起始点 转录 Ｓｅｘｔａｍａ　ｂｏｘ Ｐｒｉｂｎｏｗ　ｂｏｘ ３５ｂｐ 5-8 bp 15-20 bp 作为被RNA聚合酶 识别的信号 作用于闭合复合体向 开放复合体转化的过程 识别domain DNA双链解离 domain 机能:ＲＮＡ聚合酶与两保守区域特异性结合，形成复 合物，然后在转录起始位点附近发生解链，使ＤＮＡ 双链局部解开，ＲＮＡ聚合酶开始转录后，ＲＮＡ就开 始形成，核心酶就沿ＤＮＡ向前推进， σ因子即从转 录起始复合物上解离。 转录效率的决定因素:由启动子中碱基的组成决定。 －３５区很大程度上决定了启动子的强弱，ＲＮＡ聚 合酶容易识别强启动子，而对弱启动子识别能力 较差。此外，前导序列(即＋1到Ｐｒｉｂｎｏｗ　ｂｏｘ)的 长短影响着转录的效率。另外，两保守区域之间的 间距亦决定转录效率。 2. 转录开始 (initiation) 5’ ３’ 编码链 模板链 RNA最初的核苷酸形成的阶段 形态发生变化 5’ ３’ 编码链 模板链 5’ 3.转录的伸长 5’ ３’ 编码链 模板链 5’ ３’ 编码链 模板链 概念:在一个基因编码区下游的可被ＲＮＡ聚合酶 识别且停止ＲＮＡ合成的一段ＤＮＡ序列。 分类 强终止子:不依赖蛋白质辅助因子而实现 终止作用。 弱终止子:需依赖蛋白质辅助因子才能实现 终止作用，该辅助因子称为释放因子，又称为 ρ因子。 异同 ?相同点:即为回文序列，由几个碱基对的不重复节段隔 开组成的两个重复部分，通常每个重复序列为７－１２ｂｐ 碱基。 ?不同点 a．强终止子的回文序列中富含Ｇ／Ｃ碱基对，而在回文序 列的下游方向有６－８个Ａ／Ｔ碱基对，转录后形成的Ｒ