雷公藤内脂醇对体外培养人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株（COC-%2c1-%2fDDP）活性影响.pdf

摘要 摘要 目的： 本实验旨用不同浓度雷公藤内脂醇对人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株 和量效关系。以期寻找对耐顺铂治疗的上皮性卵巢癌病人的有效治疗药物。 方法： 1 养，将细胞密度调整至5×105／ml，置培养瓶中，在37C、5％C02，饱和湿度条 件下于恒温培养箱内培养。每2-3天细胞长满后，吹打后制成单细胞悬液，离心 1000r／min X 10rain，弃上清液，更换COCl／DDP完全培养基，按5105／ml密度补 充液体容量至7ml接种到培养瓶内。 2 孔板中，在37℃、5％C02，饱和湿度条件下于恒温培养箱内培养5d，每天取三孔 细胞，以台盼蓝法计算单位活细胞数量，并取平均值。以细胞密度为纵轴，以 时间为横轴绘制COCl／DDP细胞生长曲线图。通过生长曲线，可以显示COCl／DDP 细胞的生长周期，确定最佳干预时间。 3雷公藤内脂醇对COCl／I)DP细胞增殖的影响：雷公藤内脂醇作用组用不 75ng／ml、100ng／m1)干预，分为8个浓度雷公藤内脂醇作用组；空白对照组用 用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测每孔光吸收值(0D值)的大小可反映细胞的 数量及活性，OD值越高则细胞活性越强。结果可反映雷公藤内脂醇对COCl／DDP 细胞增殖的影响，同时计算细胞抑制率及ICso值(IC50值即细胞存活率为≤50％ 时的药物浓度，表示药物的细胞毒性)。 4雷公藤内脂醇对COCl／DDP细胞形态及超微结构的改变：通过倒置显微 镜及透射电子显微镜下观察了空白对照组(COCl／DDP细胞专用培养基)、低浓 胞的细胞形态及超微结构的改变。 Ⅱ 摘要 结果： 1 曲线，第l、2、3天，细胞增殖活跃，第三天后细胞增殖进入平台期，之后因 生长空间限制而导致细胞密度过大及营养相对缺乏的原因，细胞量缓慢减少。 2雷公藤内酯醇对COCl／DDP细胞增殖的影响：结果可见雷公藤内酯醇对 COCl／DDP细胞的抑制作用呈剂量和时间依赖性。从3ng／ml到100ng／ml的雷 公藤内酯醇均可明显抑制COCl／DDP细胞的生长增殖，其药物作用48h后的IC∞ 为药51．76ng／ml，药物作用72h后的IC∞为10．78ng／ml。 3雷公藤内脂醇对COCl／I)DP细胞形态及超微结构的影响： 3．1 雷公藤内脂醇作用后COCl／DDP细胞形态的改变：通过倒置显微镜可 胞分裂状及成串细胞团减少，细胞变扁平，透光性减少，细胞数量较空白对照 组减少；高浓度雷公藤内指醇组COCl／DDP细胞细胞形态多样化，胞浆内颗粒 增多，COCl／DDP细胞数量及细胞密度较低浓度雷公藤内脂醇组更为减少 3．2雷公藤内脂醇作用后COCl／DDP细胞超微结构的改变： 3．2．1 空白对照组通过透射电子显微镜观察COCl／DDP细胞形态及超微 结构的改变，可见空白对照组COCl／DDP呈椭圆形，细胞核为卵圆形，染色质 -4--J=≥， 千苗； 3．2．2低浓度雷公藤内脂醇组可见部分COCl／DDP细胞体积较大，呈多 角形，细胞膜微绒毛较空白对照组细胞明显减少，细胞核较空白对照组变大、 内有包含物，染色质聚集、固缩、碎裂、溶解，核膜内陷，细胞质内有空泡形 成，线粒体的数目及形状改变，高尔基体碎裂等细胞衰老改变； 3．2．3高浓度雷公藤内脂醇组COCl／DDP细胞膜完整，细胞膜表面微绒毛 消失，细胞器较空白对照组增多，如线粒体增多，内质网扩张，有些细胞膜皱 缩，胞质浓缩，核团聚。多数细胞可见细胞核染色质聚集成团块状、新月状， 并凝聚在核膜周边。有调亡小体生成的典型细胞凋亡改变呈现。 结论： 1 雷公藤内脂醇对体外培养的COCl／DDP细胞有明显的抑制作用，其浓度 自3ng／m1开始有明显抑制作用，并与时间及药物浓度依赖性，药物作用48h后 的IC的为药51．76ng／ml，药物作用72h后的IC∞为10．78ng／ml。 2低浓度及高浓度雷公藤内脂醇对COCl／DDP细胞均有明显抑制作用，其 m