塞来昔布对食管癌组织中P14ARF、DAP-K和TIMP-3基因启动子甲基化状态、mRNA表达及细胞凋亡影响.pdf

删删㈣删㈣删l Y2337264 目 录 中文摘要…………………………………………………………………．．1 英文摘要…………………………………………………………………4 因启动子甲基化状态、111】5ⅢA表达及细胞凋亡的影响 前言……………………………………………………………………………………．8月lJ舌………………………………………………………………………………………’8 材料与方法…·………………………………………………………9 结果………………………………………………………………………………………·17 附图…………………………………………………………………一18 附表………………………………………………………………………………··22 讨论………………………………………………………………………………………·27 结论………………………………………………………………………………………·3l 参考文献……………………………………………………………·32 综述食管鳞状细胞癌中DNA甲基化研究进展………………………36 致{射…………………………一…………………………………………………………………·49 个人简历…………………………………………………………………50 中文摘要 子甲基化状态、mRNA表达及细胞凋亡的影响 摘 要 目的：研究发现三种途径可致抑癌基因失活。第一，基因内突变，第 二，染色体变异，第三启动子区DNA甲基化。启动子区DNA甲基化是 一个化学修饰过程，中间由酶介导，属表观遗传学范畴。从而一些研究发 展与转移有密切关系，基因启动子区甲基化后导致抑癌基因失活，功能丧 失，随之患恶性肿瘤的几率明显增加。 近年来，NSAIDS(非甾体类抗炎药)，例如阿司匹林，吲哚美辛， 塞来昔布等，可以降低患胃肠道肿瘤的风险，现已成为肿瘤防治领域的热 点之一。流行病学研究显示服用非甾体类抗炎药能降低食管癌的死亡率。 但是NSAIDS对食管癌甲基化的影响研究较少。本研究将观察食管癌患 基化的影响。 方法； 三科食管上皮鳞状细胞癌患者13例，男性9例，女性4例，男女比例9：4， 平均年龄60．85岁，患者术前、术后均经病理证实为食管鳞状细胞癌，均 未行放化疗，均未长期服用阿司匹林等非甾体类抗炎药物，均无其他恶性 肿瘤病史。实验组：患者服药前行胃镜检查并进行食管癌组织咬检，后嘱 患者口服塞来昔布400rag／每次，2次／日，取术后大体病理标本。对照组： 选取19例食管鳞癌患者，术前均未服用非甾体抗炎药，经术前各项检查 后行食管癌根治术，术后选取该患者新鲜手术食管鳞癌标本。术前、术后 取材时，标本离体后立即浸泡于事先准备好的later液中，并迅速转移至 ．80℃冰箱贮存以备用。2将对照组与实验组标本进行冰上研磨分别提取 组织DNA与RNA，并置于．80。C冰箱保存以防降解。利用特异性甲基化 PCR技术(MSP)对实验组和对照组进行甲基化检测，计算甲基化率， 中文摘要 子甲基化的同一个体前后mRNA表达。3检测实验组中服药前后标本的 凋亡率。4利用SPSS软件对实验数据进行统计分析。基因甲基化状态与 其临床病理学参数的关系应用Z检验；甲基化率采用Fisher确切概率法 检验；mRNA的表达分析与凋亡率的比较采用配对t检验统计。 结果： 1 学参数的关系 有关。DAP．K基因甲基化状态与患者的年龄、性别及有无淋巴结转移(P 均O．05)均无关。TIMP．3基因甲基化状态与患者的年龄和性别无关俨均 o．05)，与有无淋巴结转移有关(Z=5．468，P=0．019)。 情况 中甲基化率为47．4％(9／19)，经塞来昔布处理后的去甲基化率为60％ 1／19)， 因启动子甲基化率为46．1％(6／13)，对照组中甲基