中药复方对胃粘膜细胞癌变的抑制及逆转作用研究.pdfVIP

摘要 胃癌发生发展的过程很少直接从胃粘膜上皮产生，而是由多基因异常引起的渐 进性的变化，在癌变前多数经历了较长的演变，即由正常胃粘膜转变成为癌前病变， 部分发展成胃癌。胃黏膜的肠上皮化生及不典型型增生主要存在于慢性萎缩性胃 炎，虽然不典型型增生是公认的癌前病变，有发展成肿瘤细胞的潜在趋势，但是癌 前病变是一个多步骤、多因素的复杂过程，不是所有的癌前病变都会发展成为胃癌， 有的可以在进程中停止发展，甚至发生逆转或消失。此中药复方由雪胆、老龙皮、 白术、半枝莲、海螵蛸、黄芪组成。全方针对性强，配伍严谨，符合中医药的“未 病先防”思想，对胃癌癌前病变的预防和治疗有非常重要意义。 本文利用亚硝胺类化合物成功诱导出了胃癌癌前病变的细胞模型，并进行了癌 变相关蛋白的检测，借助免疫印迹，实时荧光定量RT-PCR等生物学检测方法评价 了中药复方对癌前病变的细胞株以及恶性程度较高的细胞株中相关分子的影响，初 步探究了其抑制和逆转胃黏膜细胞癌变的作用。 一、亚硝胺类化合物MNNG诱导GES．1细胞模型的建立 使用与胃癌相关的亚硝胺类化合物N．甲基．N’硝基N．亚硝基胍(MNNG)对永生 化的人胃粘膜上皮细胞系GES。1进行恶性转化实验，得到转化后细胞，称为MC细 细胞的形态以及生长特性 的表达。经MNNG处理后的GES一1细胞(命名为MC)， 均发生了改变。随传代的延续，细胞呈现典型的“岛样”克隆生长。癌变相关蛋白 N．cadherin，P．STAT3的表达量增加。 二、中药复方对MNNG诱导GES．1细胞恶性转化的抑制作用 SRB法检测中药复方对GES．1细胞的细胞毒作用，免疫印迹检测中药复方对 Twist基因的影响。SRB法检测结果显示，中药复方对GES一1细胞有～定的生长抑 制作用，说明中药复方在体外具有一定的抗肿瘤细胞增殖的活性，从中选出合适的 给药浓度。进一步研究发现中药复方下调MNNG诱导的GES．1细胞中癌变相关蛋 生了一定的抑制作用。 三、中药复方对MGC．803细胞恶性程度的逆转作用 MTT法检测中药复方对MGC．803细胞的细胞毒作用，划痕法检测中药复方对 』㈣煳 力的影响，克隆形成实验检测中药复方对MGC．803细胞克隆形成能力的影响，软 琼脂实验检测中药复方对MGC一803细胞非锚着依赖性生长的影响，免疫印迹检测 法检测结果显示，中药复方对MGC．803细胞有一定的生长抑制作用，说明中药复 方在体外具有一定的抗肿瘤细胞增殖活性，从中选出合适的给药浓度。划痕实验， 移、侵袭、克隆形成以及非锚着依赖性生长都产生了较好的抑制作用，进一步研究 产生了一定的抑制作用。 本论文综合利用现代药理学和分子生物学检测方法，成功建立了MNNG诱导 的GES．1细胞模型。初步探讨了中药复方对于胃癌癌前细胞株以及恶性程度较高的 癌细胞株的作用，揭示了此中药复方对胃黏膜细胞癌变的抑制与逆转作用，为此复 方合理开发利用提供了科学的依据。 st l：Twi 硕士研究生刘雪(药物化学) 指导教师孙向红教授 Chineseherbal ontheinhibitionand reversaleffectof compound gastric mucosalcellstobecomecancerousresearch Abstract of canceris from Developmentgastric rarely