慢性毒性实验方法-费氏.docVIP

材料与方法 1 培养基配制 1.1器皿准备： 锥形瓶（3个，250ml，带橡皮塞）,烧杯（3个，10ml），试管（10ml，30个，带橡皮塞），烧标250ml2个。 1.2配制及分装 （1）液体培养基：取250ml烧杯，加入酵母膏1.25g，胰蛋白胨1.255g，NaCl 5 g，Na2HPO4 1.25g，KH2PO4 0.25g，甘油0.75g，蒸馏水250（先取125+最后再加125）ml。分装4ml到10ml三角瓶中。然后灭菌。 （2）固体培养基：上述液体培养基成份加2%琼脂即可。 （3）高倍培养基：取250ml烧杯，加入酵母膏3.125g，胰蛋白胨3.1375g，NaCl 5 g，Na2HPO4 3.125g，KH2PO4 0.625g，甘油1.875g，蒸馏水250（125+125）ml。然后灭菌。 2 菌种复活 （2）第三代菌液的配制（5%稀释比）：取0.2ml二代菌液到装有5 ml培养基的三角瓶中，20 ℃下恒温培养48 h后于4 ℃保存备用。（最好在冰箱中放置24小时后稳定下，光值可能会稳定在200万左右。） （3）摇瓶菌液的培养: 取0.02 ml发光菌液转接到含有5 ml培养液的10 ml 锥形瓶中，于20 ℃振荡培养至对数生长期备用。本实验选取振荡培养时间为12 h。 （4）工作菌液的制备：吸取0.01 ml培养好的摇瓶菌液于10 ml 3 % NaCl溶液