利用反义rna 技术抑制酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因的表达 - 药学学报.pdf

118 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 15, 50 ( 1): 118 122 用反义RNA 技术抑制酿酒酵母羊毛甾醇合酶基因的表达 * * 王庆华, 高丽丽, 梁会超, 杜国华, 巩 婷, 杨金玲 , 朱 平 ( 中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所, 天然药物活性物质与功能国家重点实验室, 卫生部天然药物生物合成重点实验室, 北京 100050) 摘要: 羊毛甾醇合酶催化的 2, 3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和三萜类化合物生物合成分支形成的关键位点, 下调 2, 3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢途径可促进其流向三萜类化合物的代谢途径。有鉴于此, 本研究根据酿 酒酵母羊毛甾醇合酶基因 (lanosterol synthase gene, erg7) 序列设计引物, 扩增5 长片 (包括erg7 基因5 非编 码区启动子序列和部分编码区序列) 、5 短片 (包括 erg7 基因 5 非编码区部分启动子序列和部分编码区序列) 和erg7 基因编码区片 , 分别将其反向克隆到表达载体pESC-URA 上, 构建反义表达质粒。用反义表达质粒转 化酿酒酵母INVSc1, 在营养缺陷型培养基SD-URA 上筛选重组菌株。通过半定量PCR 进行检测, 结果表明: 与 INVSc1 相比, 转入erg7 基因编码区反义片 的重组菌株内羊毛甾醇合酶基因表达量没有显著变化, 而转入5 长 反义片 和5 短反义片 的重组菌株内羊毛甾醇合酶基因表达量明显降低。通过TLC 和HPLC 方法比较麦角甾 醇含量, 结果表明: 与INVSc1 相比, 转入5 短反义片 和erg7 基因编码区反义片 的重组菌株内麦角甾醇含量 没有显著变化, 而转入5 长反义片 的重组菌株内麦角甾醇含量明显降低。本研究利用反义RNA 技术抑制酿酒 酵母中羊毛甾醇合酶基因的表达, 为应用合成生物学技术在酿酒酵母中组建三萜类化合物代谢途径奠定了基础。 关键词: 酿酒酵母; erg7 基因; 反义RNA; 麦角甾醇 中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 15) 0 1-0118-05 Downregulation of lanosterol synthase gene expression by antisense RNA technology in Saccharomyces cerevisiae * * WANG Qing-hua, GAO Li-li, LIANG Hui-chao, DU Guo-hua, GONG Ting, YANG Jin-ling , ZHU Ping (State Key Laboratory of Bioactive Substance and Function of Natural Medicines and Key Laboratory of Biosynthesis of Natural Products,