重组卤醇脱卤酶的表达优化及纯化 - 化工学报.pdf

第 卷 第 期 化 工 学 报 年 月 研究论文 重组卤醇脱卤酶的表达优化及纯化 李 阳汤丽霞郑 楷王 雄江荣香 电子科技大学生命科学与技术学院四川 成都 摘要卤醇脱卤酶可以催化合成具有光学纯的环氧化物及 取代醇等一类高价值手性药物中间体 卤醇脱卤酶 的高效重组表达及纯化可以更好地促进该酶的应用通过 扩增将编码卤醇脱卤酶的基因克隆至 表 达载体中经测序鉴定后将其转入大肠杆菌 中对其重组表达条件进行优化以提高蛋白表达量同 时对该酶在已构建好的 表达体系中的表达条件也进行了优化经酶活测定及 分析选择最优条 件进行 摇瓶的表达在两种表达体系中可溶性目的蛋白的含量均大大提高 占总蛋白含量 左右 采用 阴离子交换层析技术一步纯化分别获得纯度为 的卤醇脱卤酶 和 同时 表达体系的构建为卤醇脱卤酶的生物催化特性改造奠定了基础 关键词卤醇脱卤酶高效表达 表达体系 载体纯化 中图分类号 文献标识码 文章编号