寒凉药对热证大鼠肝线粒体蛋白质组的影响 - 中国中药杂志.pdf

第３８卷第２３期 Ｖｏｌ３８，Ｉｓｓｕｅ　２３ ２０１３年１２月 　　　　　　 　 　 　 　 　 　　　　 　 　 　 　 Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１３ 寒凉药对热证大鼠肝线粒体蛋白质组的影响 李毅，卢德赵，唐利华，沃兴德，杨贞 （浙江中医药大学生命科学学院，浙江杭州３１００５３） ［摘要］　自２０世纪６０年代起，现代科学开始对热证的本质进行研究，但有关热证的病理机制和寒凉药物的作用机制等 尚未深入系统研究。该研究以具有代表性的热性中药喂饲动物造成热证模型，后用寒凉药进行实验性治疗，拟采用双向电泳 及质谱分析技术对热证模型大鼠及寒凉药治疗后的大鼠肝线粒体蛋白组进行比较，从中发现热证及寒凉药治疗后的特异性 相关蛋白质。 ［关键词］　寒凉药；热证；线粒体；蛋白质组 －１ 　　寒热是用以概括机体阴阳盛衰的两类证候。祖 至１ｇ·ｍＬ 。双向电泳相关试剂均购自ＢｉｏＲａｄ 国医学认为“阳胜则外热”、“阴虚则内热”，在临床 公司，酶解试剂均购自Ｓｉｇｍａ公司。 上热证主要表现为：恶热喜冷，烦躁不安，口眼干燥， １２　动物分组及造模　清洁级 ＳＤ雄性大鼠１８ 面红目赤，咳痰黄稠，舌红脉数等，综合起来以基础 只，体重 １８０～２２０ｇ，购自浙江大学动物实验中心， 代谢率偏高，机体能量过剩为特征。热证的形成机 随机分为正常对照组、热证模型组和药物治疗组。 理有很多，中医古籍《黄帝内经》等对其病因均有介 ［２］ 参照徐志伟等 的实验方法，正常对照组动物正常 绍，自２０世纪６０年代起，现代科学开始对热证的本 饮食，每鼠每日灌喂生理盐水４ｍＬ，共４周；热证模 质进行研究，然而目前有关热证的病理机制和寒凉 型组每鼠每日灌以温热药４ｍＬ（约含４ｇ生药），造 ［１］ 药物的作用机制等，尚未深入系统研究 。 模２周后继续每鼠每日４ｍＬ生理盐水灌胃２周；药 肝脏是人体重要的代谢器官，肝细胞中的线粒 物治疗组为造模２周后每鼠每日继续灌以寒凉药４ 体则是重要的细胞器，是细胞呼吸链和氧化磷酸化 ｍＬ（约含４ｇ生药）２周。 的中心，在能量代谢中发挥着重要的作用。本研究 １３　常规生理指标检测　４周后开始分别测定３ 以具有代表性的热性中药喂饲动物造成热证模型， 组大鼠体重增长值，２４ｈ尿量，饮水量和饮食量，并 后用寒凉药进行实验性治疗，拟采用双向电泳及质 测定肛温。 谱分析技术对热证模型大鼠及寒凉药治疗后的大鼠 １４　血清激素含量测定　４周后采用眼眶后静脉 肝线粒体蛋白组进行比较，从中发现热证及寒凉药 丛取血法。每组每只大鼠采血３～４ｍＬ，分离出血 治疗后的特异性相关蛋白质，在线粒体蛋白质组水 清，运用双抗体夹心化学发光两步法检测血清Ｔ３， 平阐述中医热证能量代谢障碍的内在物质基础及寒 Ｔ４含量；应用固相竞争化学发光酶免疫分析法测定 凉药的作用机制，进而指导中医的临床诊断与治疗。 睾酮含量。 １　材料与方法 １５　大鼠线粒体蛋白质提取及差异蛋白质分析　４ １１　药材与试剂　所有中药均采购于杭州方回春 周后处死大鼠，取肝脏匀浆，按文献方法提取肝脏线 堂药店。温热药以附子、干姜、肉桂按 １∶１∶１比例， ［３４］