分离、纯化及鉴定肝细胞和免疫细胞分泌的hmgb1 .pdf

中南大学学报（医学版） 　２０１１，３６（１１）　　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｓｕｍｅｄ．ｏｒｇ；ｈｔｔｐ：／／ｘｂｙｘ．ｘｙｓｍ．ｎｅｔ ＪＣｅｎｔＳｏｕｔｈＵｎｉｖ（ＭｅｄＳｃｉ） １０６５ 分离、纯化及鉴定肝细胞和免疫细胞分泌的ＨＭＧＢ１ １ １ １ ２ １ １ １ 萧梅芳 ，戴霞红 ，周蓉蓉 ，刘建平 ，章保新 ，赵树山 ，范学工 （中南大学　１．湘雅医院传染科，长沙４１０００８；２．现代分析测试中心，长沙４１００７８） ［摘要］　目的：分离纯化肝细胞ＨｅｐＧ２与免疫细胞Ｕ９３７分泌的高迁移率族蛋白１（ｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐ ｂｏｘ１ｐｒｏｔｅｉｎ，ＨＭＧＢ１），并加以鉴定。方法：体外培养人肝细胞ＨｅｐＧ２与免疫细胞Ｕ９３７，采用４００ｎｇ／ｍＬ的 脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）刺激２０ｈ后收集细胞培养液上清。采用超滤浓缩，阳离子交换层析，阴离子 交换层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５凝胶过滤层析结合免疫沉淀的方法，进行分离纯化；聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ ＰＡＧＥ）及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹进行蛋白分子质量及性质鉴定。结果：２株细胞分离纯化得到的蛋白经ＳＤＳＰＡＧＥ鉴 定其纯度达９０％以上，分子质量约为２６ｋＤ，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹鉴定为ＨＭＧＢ１。结论：该纯化方法可获得纯度较高 的ＨＭＧＢ１。 ［关键词］　 高迁移率族蛋白１；　分离纯化；　ＨｅｐＧ２细胞；　Ｕ９３７细胞 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２７３４７．２０１１．１１．００６ ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＨＭＧＢ１ｓｅｃｒｅｔｅｄ ｂｙｌｉｖｅｒｃｅｌｌｓａｎｄｉｍｍｕｎｅｃｅｌｌｓ １ １ １ ２ ＸＩＡＯＭｅｉｆａｎｇ，ＤＡＩＸｉａｈｏｎｇ，ＺＨＯＵＲｏｎｇｒｏｎｇ，ＬＩＵＪｉａｎｐｉｎｇ， １ １ １ ＺＨＡＮＧＢａｏｘｉｎ，ＺＨＡＯＳｈｕｓｈａｎ，ＦＡＮＸｕｅｇｏｎｇ （１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｉｓｅａｓｅｓ，ＸｉａｎｇｙａＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０００８； ２．ＭｏｄｅｒｎＡｎａｌｙｓｉｓａｎｄＴｅｓｔｉｎｇＣｅｎｔｅｒ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１００７８，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｐｕｒｉｆｙａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｙＨＭＧＢ１ｓｅｃｒｅｔｅｄｂｙｌｉｖｅｒｃｅｌｌｓＨｅｐＧ２ａｎｄｉｍ ｍｕｎｅｃｅｌｌｓＵ９３７．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＷｅｃｕｌｔｕｒｅｄｔｈｅｌｉｖｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓＨｅｐＧ２ａｎｄｉｍｍｕｎｅｃｅｌｌｌｉｎｅｓＵ９３７， ａｎｄｓｔｉｍｕｌａｔｅｄｔｈｅｍｗｉｔｈＨＭＧＢ１（４００ｎｇ／ｍＬ）ｆｏｒ２０ｈ．Ｔｈｅｎｔｈｅｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｗａｓｃｏｌｌｅｃｔｅｄ．Ｕｌ ｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ，ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅｃａｔｉｏｎ，ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅａｎｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５ｇｅｌｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ａｎｄｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎｗｅｒｅｕｓｅｄｆｏｒｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ． ＴｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｅｉｇｈｔａｎｄｉｄｅｎｔｉｔｙｏｆＨＭＧＢ１ｗａｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙＳＤＳＰＡＧＥａｎｄＷｅｓｔｅｒｎ