一种香豆素荧光标记多肽的合成及应用 - 应用化学.pdfVIP

第３１卷 第１２期 应 用 化 学 Ｖｏｌ．３１Ｉｓｓ．１２ ２０１４年１２月 　　　　　　　ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＡＰＰＬＩＥＤＣＨＥＭＩＳＴＲＹ　　　　　　　 Ｄｅｃ．２０１４ 一种香豆素荧光标记多肽的合成及应用 ａ ｂ，ｄ ｂ，ｄ ｃ，ｄ ｂ，ｄ 李　燕　刘晓艳 　张　顺 　刘　亭 　李勇军 ｂ，ｄ ｂ，ｄ ｃ，ｄ ｂ，ｄ 兰燕宇 　王爱民 　王永林 　何　彬 ａ ｂ （贵阳医学院 基础医学院；民族药与中药开发应用教育部工程研究中心； ｃ ｄ 贵州省药物制剂重点实验室；药学院　贵阳５５０００４） 摘　要　Ｓｉｒｔｕｉｎ蛋白是一类称为依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ＮＡＤ）的组蛋白去乙酰化酶，共有７个成员，均 是潜在的疾病治疗靶点。然而，目前的荧光筛选方法，只适用于ＳＩＲＴ１～ＳＩＲＴ３。因此，根据ＳＩＲＴ５的新酶活， 设计、合成了针对ＳＩＲＴ５的荧光标记多肽（ＩＳＧＡＳＥ（ＳｕＫ）ＡＭＣ），并通过ＬＣＭＳ和荧光检测证明了该荧光标 记多肽能应用于ＳＩＲＴ５的活性筛选。 关键词　组蛋白去乙酰化酶，Ｓｉｒｔｕｉｎ，ＳＩＲＴ５，荧光标记多肽 中图分类号：Ｏ６５４　　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１００００５１８（２０１４）１２１４１３０６ ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１０９５．２０１４．４００９０ 荧光物质受到紫外光或蓝紫光照射时，可激发成为激发态，当从激发态恢复至基态时，发出荧光。 荧光标记较放射标记具有无放射物污染、便于操作等优点，这使得荧光标记物在许多研究领域的应用日 趋广泛。荧光标记物质在蛋白的功能研究、药物筛选等领域也有着广泛应用。人们利用荧光标记的多 肽来检测目标蛋白的活性，并将其发展成的高通量活性筛选方法，应用于疾病治疗靶点蛋白的药物筛选 ［１］ 和药物开发（比如，各种激酶、磷酸酶、肽酶等） 。 Ｓｉｒｔｕｉｎ是一种比较特殊的组蛋白去乙酰化酶。如Ｓｃｈｅｍｅ１所示，它具有以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 ［２３］ ［４６］ （ＮＡＤ）为辅酶的去乙酰化酶活性 。研究表明，Ｓｉｒｔｕｉｎ广泛地影响着细胞各个过程，如转录 、细胞 ［７１２］ ［１３］ ［１４２０］ 凋亡 、保持基因组的稳定性 和代谢 等。具有调节Ｓｉｒｔｕｉｎ活性能力的小分子被认为是治疗包 括癌症［２１２２］ ［２３］ ［２４］ ［２５］ 、帕金森症 、肥胖、糖尿病 及其它衰老相关疾病 的潜在药物。对于Ｓｉｒｔｕｉｎ的功能及 药物发现研究，人们虽然已经开发出了荧光标记多肽的方法，即，乙酰化ＡＭＣ（香豆素）多肽。这种方法 是利用Ｓｉｒｔｕｉｎ的去乙酰化活性、胰蛋白酶（ｔｒｙｐｓｉｎ）催化酰胺键的水解反应，从而释放出荧光小分子， ［２６］ ７氨基４甲基香豆素（ＡＭＣ，图２） ；然而，如 Ｓｃｈｅｍｅ２所示，这种方法只能应用于Ｓｉｒｔｕｉｎ家族中的 ３个成员（ＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２和ＳＩＲＴ３）。 Ｓｃｈｅｍｅ１　ＣａｔａｌｙｔｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＳｉｒｔｕｉｎ 这是因为人类的７个Ｓｉｒｔｕｉｎ成员虽然均具有高度保守的结构，但是，仅有ＳＩＲＴ１、ＳＩＲＴ２和ＳＩＲＴ３具 有显著的去乙酰化酶活；而其它的ＳＩＲ