d-氨基酸氧化酶与麦芽糖结合蛋白和透明颤菌血红蛋白的融合表达.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, June 25; 24(6): 1004-1009 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究报告 D-氨基酸氧化酶与麦芽糖结合蛋白和透明颤菌血红蛋白 的融合表达 1 1 2 1 1 于慧敏 , 马现锋 , 罗晖 , 文程 , 沈忠耀 1 清华大学化工系 生物化工研究所, 北京 100084 2 北京科技大学 生物科学与技术系, 北京 100083 摘 要: D -氨基酸氧化酶(DAAO)是一种重要的工业酶。为了进一步提高DAAO 在大肠杆菌中的可溶性和活性表达, 分 别构建了麦芽糖结合蛋白(MBP)和透明颤菌血红蛋白与三角酵母DAAO (TvDAAO) 的N- 端融合蛋白。其中, MBP 融合 蛋白 MBP-TvDAAO 在组成型(JM105/pMKC-DAAO)和诱导型菌株(JM105/pMKL-DAAO) 中表达时, 目标蛋白的可溶性 表达量分别达到全细胞蛋白表达量的 28% 以上和 17%左右, 比无MBP 融合的对照菌株BL21(DE3)/pET-DAAO 分别提 高3.7 和 1.8 倍; 但其酶活水平显著下降。VHb 融合蛋白VHb- TvDAAO 在重组菌BL21(DE3)/pET-VDAAO 中摇瓶诱导 表达时, DAAO 酶活达到了3.24 u/mL, 比对照菌株BL21(DE3)/pET-DAAO 提高了约90% 。 关键词: D-氨基酸氧化酶, 大肠杆菌麦芽糖结合蛋白, 透明颤菌血红蛋白, 融合表达 Fusion Expression of D-amino Acid Oxidase from Trignoposis variabilis with Maltose Binding Protein and Vitreoscilla Hemoglobin 1 1 2 1 1 Huimin Yu , Xianfeng Ma , Hui Luo , Cheng Wen , and Zhongyao Shen 1 Department of Chemical Engineering , Tsinghua University, Beijing 100084, China 2 Department of Biological Biological Science and Technology, University of Science and Technology Beijing, Beijing 100083, China Abstract: D-amino acid oxidase (DAAO) is one of important industrial enzymes. To increase the solubility and activity of the TvDAAO from Trignoposis variabilis expressed