生物传感器检测纤维素酶活性及基因表达 - 生物通.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（１）：８６～９２ 生物传感器检测纤维素酶活性及基因表达  尹　娟　袁兴中 　汤　琳 （湖南大学环境科学与工程学院　长沙　４１００８２） 摘要　纤维素酶是一类具有多组分的复杂酶系。纤维素酶及其水解木质纤维原料的作用机制、 木质纤维原料酶水解动力学等领域的研究仍需要更深层次的分析探讨，从而完善对纤维素酶的 研究与认识。随着生物化学、分子生物学技术以及基因工程等多门交叉学科的快速发展，如何进 一步阐明纤维素酶的结构与功能，明确纤维素酶的基因表达与调控的关系，并由此拓展更多更好 的研究方法、手段，在纤维素酶的研究方面将具有重要意义。通过协同催化作用方式和氨基酸序 列的相似性介绍纤维素酶酶系的组成，概述纤维素酶各酶组分的传统检测方法，并侧重阐述各种 传感器应用于检测纤维素酶活性及基因表达的进展。 关键词　纤维素酶　生物传感器　活性　基因表达 中图分类号　Ｑ８１９ 　　纤维素是地球上最丰富且可再生的生物聚合物， ２）外切葡萄糖苷酶（ｅｘｏ１，４ 性末端的小分子纤维素。（ 是由Ｄ吡喃式葡萄糖基通过１，４糖苷键连接而成的 βＤｇｌｕｃａｎａｓｅ，ＥＣ３．２．１．９１），又称纤维二糖水解酶 β ［１］ （ｃｅｌｌｏｂｉｏｈ·ｒｏｌａｓｅ，简称ＣＢＨ）。这类酶作用于纤维素线 线性不分支的同聚多糖 。纤维物质由于结构复杂任 状分子末端，水解 １，４糖苷键，每次切下一个纤维二糖 何单一的酶都难以将其高效水解。因此，能水解天然 β 分子。（３）葡萄糖苷酶（ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ，ＥＣ３．２．１．２１，简 纤维素的纤维素酶都是复杂的多酶体系。经过二十多 β β ［３］ 年的不断研究，纤维素酶分离纯化的方法不断改进，组 称ＢＧ），这类酶将纤维二糖水解成葡萄糖分子 。 分越分越细，不同酶组分的作用机理正逐渐被阐明［２］。 　　纤维素酶属于糖苷水解酶。随着糖苷水解酶的氨 同时，由于纤维素酶作用的底物比较复杂，反应产物不 基酸序列和３Ｄ结构研究的不断增多，以及各种催化残 同，致使纤维素酶活力测定方法很多。近年来随着生 基鉴定方法出现，在氨基酸序列相似性基础上确立的 新的糖苷水解酶分类方法将糖苷水解酶分为 １１１个 物化学、分子生物学以及基因工程等多种交叉学科的 族，纤维素酶占其中的１６个族。对５，６，７，９，４５族的催 快速发展，相关领域的研究出现了更多更新的纤维素 化机制和功能氨基酸的研究成果较多。依据 Ｃａｒｂｏｈ· 酶活测定以及动力学研究方法。 ｒａｔｅＡｃｔｉｖｅｅｎｚｙｍｅｓ（法国，有关碳水化合物和酶的数 １　纤维素酶系的分类组成 ［４］ 据库）以及相关文献 ，表１列出了糖苷水解酶类纤维