bio-rad：蛋白样品制备全攻略 - 生物通.pdfVIP

Bio-Rad：蛋白样品制备全攻略 双向电泳可不是一件容易的差事，花银子花时间不说，结果还很难重复。想要搞定双向电泳，关键 在于建立一套有效、可重复的样品制备方法。方法是多种多样的，不过都基本遵循以下的原则： 1. 样品缓冲液中离子浓度的控制 总蛋白的约10-20%。这两种蛋白异军突起，常常 掩盖了其它类似大小的蛋白，使我们无视低丰度蛋 2. 溶解包括疏水蛋白在内的所有蛋白质 白的存在，也降低了双向电泳的分辨率。因此，在 3. 防止聚焦过程中已溶解蛋白质的聚焦和析 分析目的蛋白之前，我们一定要先干掉白蛋白和 出 IgG 这两个家伙。 4. 防止样品制备过程中及其后蛋白样品的酶 样品中的核酸会对等电聚焦的结果产生干扰： 或化学降解等的修饰反应 DNA 复合物在变性条件下发生解离而使溶液的粘 5. 去除或完全降解核酸及其他干扰分子 稠度增加，可阻碍蛋白质进入 IPG 胶条，并减慢 蛋白质在胶条中的移动速度。DNA 也会与样品中 6. 去除高丰度或不相关的蛋白质，提高低丰度 的某些蛋白质结合，出现人工假象和条纹。 蛋白的浓度，使其达到检测要求 具体的解决方案如下： 提高分辨率和确保重复性是双向电泳实验最 重要的两个目标。蛋白样品制备在实现这两个目标 去除盐分、去垢剂、脂类、酚类 的过程中起到了核心作用。Bio-Rad 公司的 ReadyPrep 2-D 净化试剂盒 ReadyPrep 试剂盒通过试剂增溶或差异溶解来减 ReadyPrep 2-D 净化试剂盒可去除蛋白样品 少脱尾或降低样品复杂性，从而成为用户可靠的实 中的去垢剂、盐分、小肽、脂类和酚类化合物。这 验工具。ReadyPrep 产品线包含一系列2-D 样品 些物质会干扰双向电泳。本试剂盒含有不受去垢 制备试剂盒，不仅适用于通用样品（总蛋白）处理， 剂、离液剂或其它实验中常用试剂干扰的沉淀试 而且可以将复杂样品按特定方法分级。处理通用样 剂，可充分沉淀样品蛋白，并保证了蛋白样品的回 品的试剂盒包括总蛋白抽提和蛋白净化 收效率和浓度。 （clean-up ）。样品分级试剂盒可用来降低样品复 杂程度，同时有助于低丰度蛋白的富集和鉴定。这 去除白蛋白 类试剂盒又分为两种，一种是基于蛋白不同的亚细 Aurum Affi–Gel 蓝胶小型试剂盒和层析柱 胞定位来分离，另一种是对细胞总蛋白进行分级， 通过亲和层析，Affi–Gel 蓝胶能去除血清和血浆中 从而适合于总蛋白质组分析。 90%的白蛋白。 从血清或血浆中提取的低丰度蛋白经常会受 去除白蛋白/IgG 到白蛋白和IgG 的干扰。白蛋白在血清总蛋白中的 含量约为6