血清总磷脂脂肪酸组分的固相萃取一气相色谱法分析 - 生命分析化学 .pdfVIP

维普资讯 第22巷第 2期 分 析 科 学 学 报 Vo1．22 No．2 J()URNAI()FANAIYTICAISCIENCE 20o6年 4月 Apr． 2006 文章编号 ：10066l44(2006)02—0125—04 血清总磷脂脂肪酸组分的固相萃取一气相色谱法分析 谭 力 。，鞠烷先 ，黎介寿。，周 敏。，李小双。，柳晓泉 (1．南京大学化学系 ，生命分析化学教育部重点实验室 ，南京 210093； 2．南京军区总医院普通外科研究所，南京210002； 3．中国药科大学药代研究中心，南京 210009) 摘 要：以硅胶基质为固定相，建立 了固相萃取一气相色谱(SPE—GC)分离检测血清总磷 脂中脂肪酸含量的方法。优化 了SPE的洗脱方式及 甲醇洗脱量，探讨 了衍生化步骤的 优化条件。该法对磷脂 中各脂肪酸组分测定的线性相关系数约为 0．999，回收率在 8O 左右；日内误差小于 4．8 ，日间误差小于8．9 。用 固相苹取柱分离磷脂简单、 快速、有效，用气相色谱检测磷脂 中脂肪酸组分方法稳定、可靠。 关键词 ：磷脂l脂肪酸；固相萃取柱 ；气相色谱 中图分类号：O657．7 ；O658．2 文献标识码 ：A 1 前言 血清磷脂能反映人中期饮食脂肪的摄入，在流行病学中是脂肪吸收的一种生物指标。研究磷脂组分， 检测血清 中脂类含量的变化，可以阐明细胞的生理过程和病理现象，有助于脂类代谢疾患的诊断和治疗 。 磷脂 中脂肪酸组分的测定方法一般是先进行样 品中总脂的提取和磷脂分离，再皂化释放磷脂上结合的脂 肪酸，并经脂肪酸衍生化后进行气相色谱测定。分离磷脂的常规方法是用Folch法r提取总脂，进一步用 薄层色谱分离磷脂 ]。该法 由于操作复杂，样 品易丢失，重复性差并且受薄层板面积的限制，不能同时 用于处理较多数量的样 品。用氨丙基硅胶柱 固相萃取法可实现组织中的脂类化合物的分离检测 8-1oj。 这些方法使用多种溶剂分段洗脱出中性脂、游离脂肪酸和极性脂，步骤烦琐。 本文采用硅胶固相萃取柱萃取，只使用氯仿和甲醇两种溶剂，便能方便简单的洗去中性脂、游离脂肪 酸而获得磷脂 。同时，通过改进关键实验步骤 ，不需皂化步骤，不仅速度快 ，而且可以在短时间内连续处理 较多数量的样品。方法操作简单，重复性好，结果的可靠性得到提高。 2 实验部分 2．1 仪器和试剂 HP4890型气相色谱仪，配备火焰离子化检测器(FID)、HP3398A色谱工作站(美国，Agilent公司)； HP1100series型高效液相色谱仪(美国，Agilent公司)。固相萃取柱：硅胶填充，3mL／500mg(江苏汉邦 科技有限公司)。 各种脂肪酸标准品、磷脂标准品(美国，Sigma公司)；氯仿、甲醇、正己烷 (色谱纯)(德 国，Merck公 司)；三氟化硼一乙醚溶液 (美 国，Fluka公司)。 2．2 实验方法 2．2．1 样 品前处理 取0．5mL血清或血浆，加入2mI甲醇，充分混匀，再加入 4mI氯仿，振荡，然后 以 收稿 目期 ：2004—12—15 修 回 日期 2005—03—11 基金项 目：国家杰出青年科学基金(No；国家重点基础研究发展规划 (2003CB515502) 通讯联系人 ：鞠规先 ．男．博士 ．教授+主要研究方 向为生物分析化学． 125 维普资讯 第 2期 谭 力等：血清总磷脂脂肪酸组分的固相萃取一气相色谱法分析 第22卷 3000r／min离心 l0min，吸取下层萃取液