巨噬细胞对共培养hl60细胞的杀伤作用及机理研究.docVIP

iNOS对巨噬细胞RAW264.7活性氧产生的影响 陆红玲1 赵凯2 卫涛涛2* （1：遵义医学院生化教研室，遵义563003；2：中科院生物物理研究所，北京100101； *：通讯作者） [摘 要] 目的：研究iNOS对巨噬细胞RAW264.7活性氧产生的影响。方法：用脂多糖和γ-干扰素（LPS/IFN-γ）诱导培养的巨噬细胞RAW264.7，采用蛋白质印迹及激光共聚焦显微技术，观察iNOS表达对RAW264.7细胞活性氧产生的影响。结果：LPS/IFN-γ可使RAW264.7细胞的诱导型一氧化氮合酶（iNOS）高表达，同时经佛波酯（PMA）刺激后细胞可产生呼吸爆发。结论：RAW264.7细胞经诱导后可产生大量活性氧。 [关键词] 可诱导型一氧化氮合酶（iNOS） 巨噬细胞RAW264.7 活性氧 [中图分类号] R363 [文献标识码] A The effects of inducible nitric oxide synthase on the production of reactive oxygen species(ROS) in RAW264.7 macrophages Lu Hong-Ling 1, Zhao Kai 2, Wei Tao-Tao 2* (1 Department of Biochemistry, Zunyi Medical College, Zunyi 563003; 2 National Laboratory of Biomacromolecules,Institute of Biophysics, Chinese Academy of Science,Beijing 100101; * Corresponding author ) [ABSTRACT] OBJECTIVE: To study the effects of inducible nitric oxide synthase on the production of reactive oxygen species(ROS) in RAW264.7 macrophages. METHODS: RAW264.7 macrophages were stimulated with LPS/IFN-γ. The effects of iNOS on the production of ROS were assayed by Western blotting and laser scanning confocal microscope. RESULTS: Macrophages produced respiratory burst by stimulated with PMA, and highly expressed inducible nitric oxide synthase. CONCLUSION: Inducible RAW264.7 macrophages produced a great amount of reactive oxygen species(ROS). [KEY WORDS]: inducible nitric oxide synthase(iNOS); RAW264.7macrophage; reactive oxygen species(ROS); [收稿日期] YYYY-MM-DD [接受日期] YYYY-MM-DD 陆红玲(1968年12月），贵州遵义人，硕士，副教授，研究方向：心血管疾病分子生物学 Tel：0852-8609445 [基金项目] 国家自然科学基金（No.30770492） *：通讯作者，Tel：010-  巨噬细胞是一种参与机体非特异性免疫防御的重要免疫细胞[1-2]。在受到外界刺激处于应激状态时，巨噬细胞会产生呼吸爆发，通过NADPH氧化酶产生大量的超氧阴离子；与此同时细胞内的可诱导型一氧化氮合酶基因被诱导表达，产生大量的一氧化氮[3-4]。同时产生的一氧化氮与超氧阴离子迅速反应，生成具有强氧化性的过氧化亚硝基，对细胞产生毒副作用[5-6]。 目前虽然有报道显示在免疫防御过程中，超氧阴离子和一氧化氮存在相互协同，但这一推论还缺乏直接的实验证据。我们通过观察佛波酯（PMA）刺激RAW264.7细胞中活性氧的产生及iNOS表达情况，以探讨超氧阴离子和一氧化氮协同作用的机理。 材 料 与 方 法 1 实验材料 RAW264.7细胞株来源于中国科学院细胞库,细胞培养瓶(Costar公司),DMEM培养基（Gibco BRL公司），新生牛血清（Hyclone公司），γ-干扰素、