荧光探针研究新进展.pdfVIP

《生物工程进展》2000 ,Vol . 20 ,No . 2 荧光探针研究新进展 章晓波 　徐 　洵 ( 国家海洋局第三海洋研究所 ,厦门　36 1005) 摘要 　自从 Sout hern ( 1975) 首次进行 DNA 探针杂交后 ,至今核酸分子杂交已成为分子生物学的 [ 1 ] ( 最基本方法 。Matt hew s 和 Kricka 总结了各种杂交方法 ,将其归为两大类 :一是异相杂交 hetero ) ( ) geneous assay 即固相杂交 , 目的核酸结合于不溶性支持物上 ;二是同相杂交 homogeneous assay 即 液相杂交 ,一般同时使用两个探针 。为了检测杂交 ,寡核苷酸探针需要标记 ,探针的标记物有放射 性同位素和非放射性标记物 。固相杂交常使用放射性同位素 ,荧光素是一种非放射性标记物 ,它 能检测到的DNA 浓度比吸收减色测定方法所需DNA 浓度低 100 - 1000 倍[2 ] ,在同相杂交中广泛 用于探针的标记 。最近 ,荧光探针研究获得了新的进展 , Tyagi 和 Krammer ( 1996) 建立了一种新的 荧光探针 - 分子信标探针 ,并得到许多应用 ,我们实验室也开展了这方面的研究 。本文拟对荧光 探针的研究进展作一综述 。 关键词 　荧光探针 　分子信标探针 　荧光 PCR 时 ,提出在两个互补探针的5′末端分别标记荧光素和 1 　常规荧光探针 ( ) 四甲若丹明 Tetramethylrhodamine ,因为荧光共振能 固相杂交中,探针非特异结合于支持物表面 ,降 ( ) 量转移 fluorescence resonance energy transferr FRET ( ) 低了灵敏度 。Heller 等 1982 以及 Heller 和 Morri 的效率随供体和受体之间距离的 - 6 次方而减少 ,当 ( ) [3 ] ( ) son 1985 最早进行了同相杂交试验 , 同相杂交 两者相距 20 个核苷酸 70 即产生不明显的能量转 不需支持物 ,减少了固定 目的 DNA 及除去未杂交 移 ,因此此方法中所使用的探针长度较短 ,特异性降 探针等操作 。他们的试验中使用了两个探针 ,这两 低 。 个探针分别与 目标 DNA 的两个相邻区域互补 ,第 1 2 　分子信标探针 探针在 3 ′末端标记 ,第 2 探针在 5′末端标记 ,根据 标记物的光谱特性 ,使第 1 标记物为第 2 标记物的 同相杂交一般 同时采用两个标记探针 , Tyagi 能量供体 。当探针与 目标 DNA 杂交时 , 二探针彼