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第六章 蛋白質於細胞內之分布 Distributions of Cellular Proteins 錢宗良 台大醫學院 解剖學暨細胞生物學研究所 副教授 一、前言 由於後基因體時代的來臨，新發現且具有功能的基因產物蛋白質在細胞中的分布，即成 為近日研究的重要課題。特殊蛋白質從細胞、組織、乃至於生命個體中的生理功能，常可由 其在細胞中的生成與分布而推斷得知。本章節將就細胞胞器類別，分別介紹蛋白質在各胞器 分布的可能機制。並介紹一些目前研究蛋白質的常用細胞生物學方法，以期運用在基因體學 研究，奠定並釐清功能性蛋白質的學理基礎。 二、功能性蛋白質的分布 1. 細胞核 (Nucleus) 大多數的核內功能性蛋白質由細胞質中的核醣體合成再運送至細胞核中，如調控細胞 基因表現的轉錄因子 (transcriptional factors) 。這些新合成的蛋白質可因蛋白種類不同，而 (1) 經由許多種不同的訊息傳遞機制調控，最終將蛋白質送入細胞核中並發揮功效 。目前已知 許多核內功能性蛋白質在其胺基酸序列上均具有一段特殊的訊息序列 如–Pro-Pro-Lys-Lys-Lys-Arg-Lys-Val- ，稱為核定位訊號(Nuclear Location Signal, NLS)(2,3) 。因此，如果在新發現的蛋白質中，藉由序列比對找到此NLS 訊息序列，即可推 斷此蛋白質合成後可能會被送入細胞核中 ( 圖一) 。此分布機制只是針對較大分子的蛋白 質，這些蛋白質需要靠核輸入接受器 (nuclear import receptors) 來辨識NLS 訊息序列，進 而與特殊運送蛋白 (cargo proteins) 結合，藉由主動運輸 (active transport) 將其穿過核孔 (nuclear pores) 而送入細胞核中。對於一些較小分子的蛋白質，則不需要具備此NLS 訊息 序列與特殊運送蛋白，可藉由擴散或是其他運送機制穿過核孔而送入細胞核中。基本上， 蛋白分子大於60,000 daltons 即不太可能藉由擴散自行穿過核孔而進入細胞核中；對於較 (4) 小分子的蛋白質的擴散，如5,000 daltons 以下的蛋白質，核孔是完全通透的 。為瞭解新 發現的蛋白質是否真能送入細胞核中，可藉由細胞轉染實驗 (cell transfections) 或免疫細 胞化學 (immunocytochemistry) 染色 (如果有很好的專一性抗體) ，再與DNA 特殊染色如 DAPI (激發光譜約為359 nm ；與DNA 接合後釋放光譜約為461 nm) 或是Hoechst 33342 69 (激發光譜約為343 nm ；與DNA 接合後釋放光譜約為483 nm) 等染色來做對比，即可確 定標示蛋白質是否在細胞核中(5) (圖三) 。 圖一、 細胞質內的蛋白質合成運送途徑。蛋白質在細胞質內經多核醣體合成後， 可依蛋白質所含不同訊息序列，分送入細胞核、粒線體或過氧化體中。 2. 粒線體 (Mitochondria) 粒線體的蛋白質合成除了少部份由粒線體自身基因體 (mitochondrial genome)轉錄、 轉譯而成外，大部份的蛋白質仍由細胞核的功能基因表現訊息RNA (mRNA) ，藉由細胞質 中的核醣體合成蛋白質後再運送至粒線體內膜或基質(matrix)中(6) (圖一) 。如同核蛋白，粒 線體的蛋白質亦具有特殊的訊息序列 (signal sequence) 供粒線體外膜上的特殊接受器辨 識，這訊息序列多在蛋白質的胺基端 (N-terminus) ： +H N –Met-Leu-Ser-Leu-Arg-Gln-Ser-Ile-Arg-Phe-Phe-Lys-Pro-Ala-Thr-Arg-Th