蜘蛛基因组d na cosmid 文库构建和拖丝蛋白基因的克隆3.pdfVIP

动物学报 　47 (6) :713 ～717 , 2001 A cta Zoologica S inica 　　　　　 　 蜘蛛基因组 D NA Cosmid 文库构建 和拖丝蛋白基因的克隆 李 　敏 ( 福建师范大学生物工程学院, 福州 350007) David L . Kaplan (生物技术中心 , Tufts 大学 , 马萨诸塞州 02155 , 美国) 关键词 　蜘蛛 　基因组文库 　拖丝 　丝蛋白基因 　　蜘蛛拖丝是已知性能最好的天然纤维 ( Kaplan 丝蛋白基因。由于目前对拖丝丝蛋白基因结构与功 et al . , 1994 ; Mello et al . , 1994) 。与其它结构蛋 能的研究工作均来自其 3 ′端部分cDNA 序列 , 克隆 白, 如胶原蛋白和弹性蛋白相似 , 丝蛋白具有自装 的丝蛋白基因代表的只是拖丝蛋白基因完整长度的 配性质 , 通过二级结构调节 , 以提供机械支撑。和 一部分 , 重组表达产物与天然纤维在分子构型上只 其它合成高分子比较 , 如聚酯 , 丝的柔韧性和弹性 具有一定程度的相似性。为获得人工合成完整的拖 使得它能经得起重压和疲劳。而且 , 丝膜表现出很 丝蛋白 , 迫切需要弄清楚丝蛋白全基因结构。本文 好的透明性、生物可降解性和水 - 空气界面的通透 以 N . clavipes 蜘蛛肌肉组织为材料 , 拟通过构建 性。研究证实 , 棒络新妇蛛 ( Nephila Clavipes ) 蜘蛛基因组 DNA Cosmid 文库 , 根据已知的拖丝丝 的拖丝是所研究的各种类型的丝中 , 功能指标最优 蛋白部分 cDNA 序列 , 合成寡核苷酸探针 , 筛选、 的 ( Kerkam et al . , 1991 ; Cunniffet et al . , 1995) 。 克隆出天然拖丝丝蛋白基因。 因拖丝的特殊性质 , 其作为生物材料应用在医学上 1 　材料和方法 表现出极大的潜力 , 如作为缝合材料、细胞膜以及 组织工程所需的临时搭架等。 11 　材料 天然拖丝丝蛋白的分子量尚未确定 , 几篇文献 N . clavipes 蜘蛛由美国 Tufts 大学 Kaplan 教 报道分别为 275 kD , 324 kD 和 740 kD ( Mello et 授提供。SuperCos 1 Cosmid 载体、包装蛋白 Giga al . , 1994 ; Candelas et al . , 1981 ; Jackson et al . , pack ⅢXL 和宿主菌 XLBlue MR 购自 Stratagene 。 1995) 。对丝蛋白水解分析 , 证实丝蛋白主要是由 地高辛11dA TP 3 ′末端加尾试剂盒、碱性磷酸酶 两个最小的氨基酸 ———甘氨酸和丙氨酸高度重复组 偶联羊抗地高辛 Fab 片段、化学荧光底物试剂 34 ( ) 成 , 重复分别达到 42 %和 25 % , 其它残基为谷氨 甲氧基螺甾 { 1 , 2二氧六环3 2′