测定多肽链的氨基酸序列 - 河北科技大学.docVIP

第 7 次课 2 学时 上次课复习： α-氨基酸的烃基化反应常用的二种试剂是？ α-氨基酸的茚三酮反应呈现的颜色是否都一样？ 常用的打开二硫键的氧化剂和还原剂是什么？ 哪三种氨基酸在280nm紫外光下有吸收峰？ 本次课题（或教材章节题目）：第三章　蛋白质　 第二节　蛋白质概述 第三节 肽及蛋白质的一级结构 教学要求： 了解蛋白质的分类、形状及大小、构象和结构、生物学功能、肽与蛋白质的人工合成； 理解并掌握肽键、肽平面、二面角、，肽键的双键性质以及由此带来的对蛋白质肽键构象的影响；蛋白质的氨基酸序列与生物功能 熟记几种主要蛋白酶的作用部位和蛋白质氨基酸序列确定的方法，能根据实验推断简单多肽的一级结构。 重 点：蛋白质一级结构的测定步骤；蛋白质的氨基酸序列与生物功能；蛋白质一级结构的概念；肽键的特点 难 点：蛋白质一级结构的测定 教学手段及教具：课堂讲授与PowerPoint演示相结合。 讲授内容及时间分配： 复习：5分 第三章　蛋白质 第二节蛋白质通论 一、蛋白质的化学组成与分类 二、蛋白质的形状和大小 三、蛋白质的构象和结构蛋白质的氨基酸序列与生物功能 四、蛋白质生物学功能 第三节肽及蛋白质的一级结构（15分） 一、肽 二、蛋白质的一级结构 三、蛋白质氨基酸序列与生物功能 四、肽与蛋白质的人工合成 小结：5分 课后作业 1.蛋白质系数；单纯蛋白质；结合蛋白质；单体蛋白质；寡聚蛋白质；去污剂；多肽的等电点；肽平面、二面角 2.肽键的特点；蛋白质紫外吸收特点；茚三酮反应；双缩脲反应； 3.肽的酸碱特性；求某肽的pI及在某pH下所带净电荷； 4.蛋白质一级结构测定序列的步骤？ 5.举例说明氨基酸序列与生物功能的关系？ 6.某肽加入测定α－氨基N末端的试剂后没反应。说明此肽是环肽？ 7.胰岛素人工合成的主要途径？ 195页习题：3,4,5，8 参考资料 《生物化学》科学出版社　　现代生物学精要速览中文版　　王镜岩等译　 第三节 蛋白质的共价结构　162页 肽 蛋白质的一级结构及序列测定 蛋白质的氨基酸序列与生物功能 肽与蛋白质的人工合成 一、肽 肽和肽键的结构 肽的两性解离 肽的化学性质 天然存在的活性肽 1.肽和肽键的结构 肽是氨基酸的线性聚合物。 氨基酸顺序：N端－(C端 氨基酸残基；寡肽与多肽；环肽 肽键的特点 具有部分双键特性，不能自由旋转,呈现相对的刚性和平面化。 肽键的亚氨基没有明显的解离和质子化。 除脯氨酸外多以反式结构存在。 肽平面、肽单位、二面角 多肽中的二硫键 肽的命名 开链肽都具有游离的α氨基和α羧基？ 有的开链肽的N端或C端的游离的α氨基或α羧基被别的基团结合（如烷基化、酰化等）或N端残 基自身环化（如：谷氨酸）。 脯氨酸在N端也没有游离的α氨基。 2.肽的两性解离　　 166页 具有两性解离和等电点： 多肽链中可解离功能团的pKa值） 例：pH7时，所带静电荷是？pI是？　是 0 pI=(4.6+7.8)/2 求：三肽Lys-Lys-Lys的pI 每个侧链解离后带有1/3个正电荷，此时的pH为pI。 利用公式： pH = pKa + lg（[碱]/[酸]） 　　　　pH = 10.2＋ lg（[2/3]/[1/3]） pH = 10.2＋0.30 3.肽的化学反应 多肽链的水解：酸水解、碱水解、酶水解 具有旋光性 颜色反应 紫外吸收 颜色反应 茚三酮反应－－紫色，用于定性和定量肽。 双缩脲反应－－紫色或兰紫色(λ＝540nm）。 －－－双缩脲法测定蛋白质的含量 含有两个或两个以上肽键的化合物有此反应。氨基酸没有 　 紫外吸收 具紫外吸收：在280nm处有最大吸收峰，可进行肽类定量测定。 原因是： 含Trp、Tyr、Phe 　　　　　－－－－紫外吸收法测定蛋白质含量 4.天然存在的重要多肽 以蛋白质形式存在: 相对分子质量在6000以上的多肽称为蛋白质。 多肽与蛋白质无严格的界线。 以天然活性肽形式存在： 分子量比较小的多肽以游离状态存在。具有特殊的生理功能，常称为活性肽 在天然活性肽中含有非蛋白质氨基酸和肽键。 生物活性肽(Natural peptide) 167页 脑啡肽； 激素类多肽； 抗生素类多肽； 谷胱甘肽；　 蛇毒多肽等。 脑啡肽（五肽） Leu-脑啡肽和Met-脑啡肽。 ＋H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-COO－ ＋H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COO－ 前体物：前脑啡肽原（含267个残基） 有和吗啡类似的镇痛作用（大脑中有吗啡受体）。 内啡肽 包括 α－内啡肽（16肽） β－内啡肽（31肽） γ－内啡肽（1