河蟹颤抖病病毒的分离纯化及其动物致病性试验.pdfVIP

维普资讯 第 17卷 2期 中 国 病 毒 学 17(2)：185 188 2002年 5月 VIR(]IJ()GICA SINICA MRv 2002 河蟹颤抖病病毒的分离纯化及其动物致病性试验 孙学强，陆承平 (南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放宴验墅，南京 2101395) IsolationandPurificationoftheEriocheirsinensis “TrembleDisease”Virus and ItsPathongenityon Crabs SUN Xue-qiang，LU Cheng-ping’’ (Kaylab AniatatDiseaseDiagnosis＆ tmmunotogy，Ministry ～ riculture，NanjlngAgrlUniv，Nawiteg210095，China) Abstract：TheEriocheirsinensis(Es)thatsuffered “tremblediease”byartificialinfectionwereho— mogenated Thesupernatantwasconcentratedwithp。】yethyIeneg1ycol(PEG)6000andpurifiedby gelfiltrationchromatogmphwithSepia,arose4B．Theeluatescollectedwereconcentratedat4℃ ．The virusparticlesinthefirstpartofthe eluatescouldbeseenunderelectronmicroscopy．Thediameterof virionsvarifiedjn50～ 100nm Sinopotamon denticu缸 ￡“?IIartilicia】inlectedwith thepurified virus becamej1]．BvdoubleantibodysandwichEIISA detection．theresultsshowedthattherewassignifi— cai]tdiflerencebetweenthejnfectedandthecentre】crabs Keywords：Eriocheirsinenssi；Trembledisease；Virus 摘要：特人工复制发病的河蟹(中华绒赘蟹)组织匀浆，离心上清经聚乙二醇(PEG6000)沉淀，再经分子筛层析．分 部收集分别测定256--300am的吸光值。各收集峰嗣PEG20000，于4℃浓缩．制作负染标本经透射电镜观察，发现 在第一峰浓缩液中存在大量球状病毒颗粒 大小5O 100 。用纯化的病毒进行动物致病性试验，接种石蟹(锯齿 华溪蟹)发生 “颤抖病”，并用ELISA双抗体夹心法进行检测，显示感染石蟹较对照石蟹有明显差异。 关键词：河蟹 ；颤抖病；病毒 中图分类号：$945 文章标识码：A 文章编号：1003．5125【2002 随着河蟹养殖业的迅猛发展，“颤抖病 ”的危害 1．1l 病料及处理 取人工复制发生 “藏抖病”河 也 日益严重，已成为 目前威胁我国河蟹养殖业发展 蟹 (中华绒螯蟹 Erioch￡irsinensis．ES)20只，其中第 的最主要的疾病。尽管有报道数种细菌与该病有一 l代 (BY1)及第2代 (BY2)各 l0只l】一，解剖肝胰脏、 定的关系，但是许多研究结果表明，其病原是一种病 胃肠、腮 、神经等组织，取样作超薄切片，电镜检查证 毒。孙学强等用病蟹组织除