局部应用尿激酶对血管吻合术后内皮细胞愈合影响.pdfVIP

摘要 局部应用尿激酶对血管吻合术后内皮细胞愈合的影响 实验目的 显微外科血管吻合技术己经被应用于外科临床的各个领域，其中血管 吻合后_虹流通畅是手术成功的关键。目前，微皿管吻合血管危象的发生 率仍在5％．10％左右，如何促进血管内皮细胞早期修复，避免血管危象 和血栓形成，仍是显微外科需要解决的问题。本实验通过动物实验，应 用扫描电镜观察，免疫组化方法并对结果进行分析，探讨局部应用尿激 酶对血管吻合术后内皮细胞愈合的影响。 ／ f材料与方法 一、实验动物与分组 ＼＼ 雄性Wistar大鼠63只，体重200—250克。随机分为实验组(尿激酶) 和对照组(肝素及生理盐水)。每组再按J：fIL管吻合术后处死动物的时间先 后，随机分为24、72小时和7天共三组，每组7只。 二、 实验操作与标本收集 麻醉大鼠后，游离双侧颈总动脉，无损伤动脉夹阻断血流，在横断血 管，利多卡因溶液冲洗，用10—0无损伤缝线，进行切断血管的端端吻合， 手术过程中，分别向吻合血管腔冲洗尿激酶液(100iu／m1)或肝素溶液 (25mg／100m1)或生理盐水，依同样方法，处理另外一侧颈总动脉。术 后各组动物不给药物，并按术后时间分别切取吻合口部位的血管做标本。 三、 扫描电镜标本制作 分别在血管吻合术后24h、72h、7d取材，于大鼠颈总动脉吻合口上下 各0．5crn切取血管，剖升管腔，用戊二醛和锇酸双重固定，脱水，醋酸 正异戊酯置换后，临界点干燥离子溅射喷金，用扫描电子显微镜观察。 观察时为说明缝线表面及针孔处覆盖情况，实验分组，每组2只，4个 吻合n，每个吻合口8-9针，32—36条缝线，64—72个针孔。 四、吻合口组织的PCNA的免疫组化研究 一抗为PCNA小鼠抗大鼠单克隆抗体IgG，分别在血管吻合术后24h、 72h、7d取材，于大鼠颈总动脉吻合口上下各0．5cm切取血管。戊二醛 巾固定，常规石蜡切片，脱蜡至水，高温高压抗原修复2分钟，H202和 小牛血清分别作用30分钟。一抗(稀释浓度为1：200)4。C孵育过夜，二 抗和sP复合物孵育30分钟，DAB显色。苏木素复染，脱水，透明封片。 五、 各组数据用百分比表示，足见比较用x2检验。 结果 术后24小时，3组缝线均有外露部分，覆盖缝线及针孔的成分有： 纤维素、内皮细胞、血小板和红细胞，其中以纤维素为主。生理盐水 组于缝线表面和针空处鲜有内皮细胞出现，为7．5％。尿激酶组的内皮 细胞出现情况与肝素组相似，分别为24％和23％，与生理盐水组有显 著差异(P0．05)。术后72小时，外露部分减小，覆盖缝线及针孔的 成分也有所不同，为纤维素和内皮细胞，此时大部分缝线表面有内皮 细胞出现，3组间无显著性差异，尿激酶组、肝素组和盐水组分别为 40％、47％和39％。术后7天，3组缝线偶有外露部分，缝线表面基本 被内皮细胞和纤维素所覆盖，其中以内皮细胞为主。3组每根缝线表面 均有内皮细胞覆盖，比率为100％。 PCNA免疫组化结果显示术后24小时，各组均出现PCNA阳性的内 皮细胞和平滑肌细胞，尿激酶组、肝素组和生理盐水组的阳性率分别 为：86％、93％和90％，P0．05；术后72小时，尿激酶组、肝素组和 生理盐水组内皮细胞和平滑肌细胞的阳性率分别为：65％、68％和57％， P0．05；术后7天时内皮细胞和血管平滑肌细胞少量增殖，三组分别 为：15％、20％年n15％。) 广一 结论 局部应用尿激酶和肝素能够减轻吻合术后早期血小板和红细胞的吸 附，能够促进内皮细胞的早期修复，尿激酶作用机制可能与肝素相似。 关键词：尿激酶；内皮细胞；显微血管吻合；肝素；扫描电镜■PCNA 入 abstract English endothelialafter oflocal ofurokinaseto Influence