血管活性肠肽对TNF-α介导大鼠滑膜细胞增殖影响及其相关分子机制的研究.pdfVIP

中文摘要 血管活性肠肽对TNF．旺介导大鼠滑膜细胞增 殖的影响及其相关分子机制 摘 要 arthritis，RA)是 目的：类风湿性关节炎(rheumatoid 一种慢性炎症性自身免疫性疾病，以滑膜组织炎性增生、 关节进行性破坏为特征。RA的病因尚未阐明，最近研究 cytokines)弓l发 发现，由促炎性细胞因子(pro—inflammatory 的成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes，FLS) 过度增生在RA疾病进展中有着重要作用。TNF～是滑膜 细胞增生和活化的有效刺激物，已有文献报道，它可以通 过上调TNF受体2基因表达促进RA患者滑膜细胞增生。 TNF．c【有两类受体即TNF．Rl和TNF．R2，其中TNFRl 为高亲和力受体，胞内部分含死亡域(deathdomain，DD)， 主要引起细胞凋亡；TNFR2为低亲和力受体，胞内部分 不含死亡域，具有促进和抗细胞凋亡的双重作用，但以抗 细胞凋亡作用为主，二者分布广泛并为TNF．伐发挥重要生 物学功能提供了结构基础。但TNF．R在SD大鼠滑膜细胞 上是否有表达尚无报道。研究表明血管活性肠肽 (vasoactiveintestinal peptide，ⅥP)具有明显的免疫调节 和抗炎作用。最近发现，在整体实验中，VIP可以显著降 arthritis，CIA)小鼠的 低胶原性关节炎(collagen．induced 发病率和严重程度；在离体实验中，VIP可以抑制RA患 者FLS增生及对IL一6、IL．8的分泌。为深入研究ⅥP抗 II) RA的作用及机理，本研究采用II型胶原(collagentype 中文摘要 尾根部皮内注射建立SD大鼠CIA模型，体外分离培养 CIA和健康SD大鼠膝关节滑膜细胞，观察VIP对n盯。u 介导滑膜细胞增殖和TNF受体基因表达的影响，以初步探 讨其作用的分子机制。 方法：(1)原代培养CIA和健康大鼠滑膜细胞，应用 噻唑蓝(MTT)比色法检测VIP对TNF—a介导的大鼠滑 膜细胞增生的影响。用含10％胎牛血清的DMEM培养基 cells／ml，接种200gl／孔到96孔 调整细胞浓度为2×104 细胞培养板中。实验分四组，每组设5个重复孔：①对 照组；②TNF．0【组，细胞培养基中加入TNF-Ⅱ10嵋／L； 10’10mol／L、 ③TNF．叶vIP组，细胞培养基中加入VIP 10{mol／L或10击mol／L预孵育1h后，加入TNF．u 10嵋／L； 10。omol／L、10{mol／L ④VIP组，细胞培养基中加入VIP d。 或10一mol／L。加入上述处理因素后，孵育滑膜细胞5 然后用MTT比色法测定滑膜细胞增殖。(2)采用反转录 PCR(reversePCR，RT-PCR)方法检测VIP transcription 对TNF．a介导健康SD大鼠滑膜细胞TNF-R1和TNF-R2 mRNA表达量的变化。实验分组：①对照组；②TNF．a 组，细胞培养基中加入TNF。a 10嵋／L；③TNF．叶VIP组， 10。8 细胞培养基中加入VIP mol／L预孵育lh后，加入 TN