.生药的化学成分,生药的鉴定.pptVIP

四、分光光度法 1.紫外分光光度法 UV（200～400 nm）定性或定量测定。在紫外光区，灵敏度和精密度较高，一般每1 ml溶液中含有数mg的物质即可测定。 2.可见光光度法 比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法。 * 3.红外分光光度法 红外光谱的专属性强，所以红外光谱对生药定性鉴别可得到较准确的结论。红外光区的灵敏度和精密度较低，一般需数百mg的供试品进行测定。红外光谱适用于纯的生药成分的鉴别。 4.原子吸收分光光度法　本法的特点为专属性强，检测灵敏度高，测定快速，是目前用于测定生药和生药制品中微量元素的最常用一种方法。 * 第八节 生物检定 以药理学为基础，利用药物对于生物（整体和离体组织）所起的作用，以测定药物的效价或作用强度的一种方法。 * 第九节 DNA分子标记鉴定 DNA分子标记技术是直接分析生物的基因型，与传统方法比较具有下列特点：①遗传稳定性②遗传多样性③化学稳定性。 * 一、DNA分子标记技术的方法与原理 （一）限制性内切酶酶切片段长度多态性 限制性内切酶酶切片段长度多态性（RFLP）是研究最早的DNA分子标记技术，由于RFLP在操作过程中需要同位素标记，同时所需DNA量较大、操作步骤繁杂、花费高等因素使其应用受到一定限制。 * （二）基于聚合酶链式反应的标记技术 1.随机扩增多态性DNA和任意引物PCR 适于未知序列的基因组DNA的检测。 2.扩增片段长度多态性（AFLP） AFLP是RFLP与PCR相结合的一种技术。AFLP具有RAPD多态性高和RFLP检测可靠的优点。 3.PCR扩增的特定片段的限制性位点分析（PCR-RFLP） PCR-RFLP技术由于引物的合成具有特异性，从而使扩增产物也具有特异性。 * 4.简单重复序列和简单序列重复区间扩增多态性 微卫星序列又称简单重复序列是以1～6个核苷酸为基本重复单位的串联重复序列，其长度大多在100 bp以内。 5.DNA测序方法 运用DNA测定技术建立中药正品药材及相关伪混品的原动植物基因序列数据库，然后对待测样品进行测序，对照数据库即可鉴定出中药材的真伪，也可以鉴定出中药材种属关系及道地性等特征。 * 二、DNA分子标记技术在生药鉴定中的应用 （一）在植物进化、分离、鉴定中的应用 应用DNA分子标记技术研究种间、属间的DNA变异情况，从而揭示物种的亲缘关系，为物种鉴定及系统学研究提供依据。 （二）在生药鉴别中的应用 用RAPD技术对人参、西洋参、三七及桔梗、紫茉莉、土人参和商陆4种人参伪品DNA进行PCR扩增，所得DNA指纹图谱可用于区别人参属的三种生药及伪品。 * （三）在道地药材鉴定中的应用 一个物种的种内多样性是道地药材品质形成的生物学基础。道地药材与非道地药材的本质区别是作用物质基础有效成分的差异，其形成主要受遗传因子和环境因子的影响。 * 课后思考与练习 1．生药的化学成分常见类型有哪些？ 2．生药鉴定的常见类型有哪些？ * 2.水分测定 生药中的水分含量，是影响到生药品质的重要因素。测定用供试样品，一般应为直径不超过3 mm的颗粒或碎片。 1）烘干法 适用于不含或少含挥发性成分的。 2）甲苯法 适用于含挥发性成分的。 3）减压干燥法 适用于含有挥发性成分的贵重药品。 * 3.灰份测定 规定生药的灰分含量限度，对保证生药的质量有一定意义。测定灰分的供试品，需粉碎后通过二号筛，并将颗粒混合均匀。 1）总灰分测定：本身经过灰化后遗留的不挥发性无机盐，以及表面附着的不挥发性无机盐类。 2）酸不溶性灰分测定：不溶于10%盐酸中的灰分。 * 4.浸出物测定 有的生药的有效成分或主成分不明确，或其成分明确尚无适宜、成熟的含量测定方法，选用适当的溶剂，测定浸出物的含量，以评价生药的品质。通常选用水，一定浓度的乙醇（或甲醇）、乙醚作浸出物测定。 1）水溶性浸出物测定 冷浸法 热浸法 2）醇溶性浸出物测定 3）醚溶性浸出物测定 * 5.挥发油测定 适用于含挥发油成分的生药，常采用水蒸气蒸馏法提取。根据挥发油比水轻或比水重的特点，在特制的挥发油测定器中进行测定，测定方法分为甲法和乙法。测定供试品，一般须粉碎使能通过二号至三号筛，并混合均匀。 * 三、生药的限量检查 为了保证临床用药安全，首先必须保证药品安全，因此对有害物质作限量检查。 1. 砷盐的检查 砷盐≦10 ppm 2. 重金属的检查 重金属≦20 ppm * 3. 农药残留的检查 有机氯类农药：滴滴涕（总DDT）、六六六（总HBC）；有机磷类农药：敌百虫 4.其他有害物质的检查 有的生药由于寄生于有毒植物而产生有害物质，亦须