实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA临床意义.docVIP

实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA临床意义【摘要】 目的 用实时荧光定量PCR检测乙型肝炎患者HBVDNA结果进行分析,以探讨其临床诊疗意义。方法 对850例临床标本用时间分辨荧光免疫技术定量测定乙肝病毒血清学指标,用荧光定量PCR法检测血标本中的HBVDNA,并依据乙肝两对半结果进行归类分组。结果 302份HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)标本中有261份HBVDNA为阳性,阳性率为86.4%,其PCR定量拷贝数为(2.21±0.76)×107/ml;321份HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)标本有96份HBVDNA阳性,阳性率达到29.91%,PCR定量拷贝数为(1.69±0.98)×106/ml;32份HBsAg(+)、HBcAb(+)标本中有9份HBVDNA为阳性,阳性率为28.13%,28份HBeAb(+)、HBcAb(+)标本有4份PCR HBVDNA阳性,阳性率14.29%;11份HBcAb(+)标本有6份PCR HBVDNA阳性,阳性率为42.9%;74份HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)标本有5份HBVDNA阳性,阳性率6.75%;13份HBsAb(+)、HBeAb(+)阳性标本有2份PCR HBVDNA阳性,阳性率为14.3%;12份HBsAb(+)、HBcAb(+)标本有1份HBVDNA阳性,阳性率7.69%;4份HBsAb(+)的标本HBVDNA均为阴性,PCR定量拷贝数为 【Key words】 Hepatitis B Serum Markers;Timeresolved Fluorescence Immunoassay;Fluorescence Quantitative PCR Technique;Clinical Application DOI:10.3760/cma.j.issn2010.01.48 作者单位:628000广元市中心医院 本文用荧光定量PCR法研究乙型肝炎患者HBVDNA定量检测与血清学免疫标志物水平之间的关系。并就其测定的临床价值报告如下。 1 资料与方法 1.1 血清标本来源 850份血清标本均取自2009年1月至2009年6月本院门诊及住院的患者。其中,男385例,女465例,平均年龄37.2岁。 1.2 血清标本的采集 采用一次性真空采血管,清晨空腹抽取静脉血5 ml,离心分离血清,20 ℃冻存备用,集中检测。 1.3 试剂 乙肝血清标志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb定量采用上海新波公司生产的时间分辨乙肝两对半试剂盒。荧光定量HBVDNA采用深圳达安公司HBVDNA扩增试剂盒。 1.4 仪器 乙肝定量使用ANYTEST 2000时间分辨仪及配套洗板机和混匀仪,荧光定量PCR用罗氏LightCycle实时荧光定量检测系统检测。 1.5 方法 乙肝标志物检测采用时间分辨法,HBVDNA采用实时荧光定量PCR法。 1.6 统计学方法 配对卡方检验。 2 讨论 血中HBVDNA的存在是HBV感染最为直接,最为灵敏和最为特异的指标。实时荧光定量PCR是目前临床检测血清HBVDNA常用的分子生物学方法。检测重复性好,而且实时荧光定量PCR还解决了抗病毒药物疗效观察的一大难题。850例标本,大三阳302例标本中有261份HBVDNA为阳性,阳性率为86.4%,其PCR定量拷贝数为(2.21±0.76)×107/ml;小三阳321例中有96份HBVDNA阳性,阳性率达到29.91%,PCR定量拷贝数为(1.69±0.98)×106/ml;32份HBsAg(+)、HBcAb(+)标本中有9份HBVDNA为阳性,阳性率为28.13%,28份HBeAb(+)、HBcAb(+)标本有4份PCR HBVDNA阳性,阳性率14.29%;11份HBcAb(+)标本有6份PCR HBVDNA阳性,阳性率为42.9%;74份HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)标本有5份HBVDNA阳性,阳性率45.45%;13份HBsAb(+)、HBeAb(+)阳性标本有2份PCR HBVDNA阳性,阳性率为14.3%;12份HBsAb(+)、HBcAb(+)标本有1份HBVDNA阳性,阳性率7.69%;4份HBsAb(+)的标本HBVDNA均为阴性,PCR定量拷贝数为 1