pH反馈补料方法在γ-聚谷氨酸发酵中的运用.pdfVIP

第43卷 第 5期 工 业 微 生 物 Vo1．43No．5 2013年 10月 IndustrialMicrobiolo~~ Oet．2013 doi：10．3969／j．issn．1001—6678．2013．05．007 pH反馈补料方法在 一聚谷氨酸发酵中的运用 乔长晟h， 兰玲峰 ， 张 帅 ， 李 政 ， 郝华璇 (1．天津科技大学生物工程学院工业微生物重点实验室，天津 300457； 2．天津工业大学纺织学院，天津 300387；3．天津北洋百川生物技术有限公司，天津300457) 摘 要：建立了一种基于发酵液pH反馈控制^y-聚谷氨酸发酵中葡萄糖补加的方法，即：发酵过程 中pH再次回升至7．0时，补加浓缩葡萄糖使发酵液中残糖达到 1．5g／L时停止补加。结果表明， 利用该补料方法可较理想地将发酵液中葡萄糖浓度控制在 1．0g／L，发酵终产量达到42．5g／L，产 率提高了46．8％，谷氨酸转化率提高了17．7％。 关键词：pH反馈；一聚谷氨酸；分批补料发酵；地衣芽孢杆茵CGMCC3336 ． 聚谷氨酸 (简称 ^y．PGA)是一种天然存在的 通常用在培养过程中pH升高或降低的微生物培养 由L．型或／和D．型谷氨酸通过 一酰胺键连接的同型 系统 ]。在培养过程中的pH值上升可以作为补料 聚酰胺高分子化合物。 一PGA是一种具有多种用途 分批培养过程中补加葡萄糖的信号 。由于这些 的、水溶性的、可食用性的及可生物降解的生物高分 方法通过设置pH控制的上限，因此在补料过程中 子…，由于^y—PGA具有独特的物理化学及生物学特 发酵液呈现有糖．无糖一有糖一无糖的循环，这种有糖 性 ，其在制药业、食品加工行业、化妆品行业 以及农 无糖的循环对菌体代谢存在较大的影响。 业上将具有广泛的运用 。 本研究采用一种基于pH反馈控制补料分批培 补料分批培养技术是一种常见的微生物培养方 养方法，通过设定 pH控制上限以及补料过程中补 法，在以下情况采用补料分批培养能收到满意的效 加量，较好的解决了恒pH补料分批培养过程中葡 果，即：底物抑制、细胞高密度培养、葡萄糖效应、分 萄糖周期性缺乏的问题，并与恒定葡萄糖浓度补料 解代谢抑制、营养缺陷菌种、延长培养时间、以及补 工艺进行了比较。 水降低发酵液黏度 J。 1 材料与方法 目前流加糖的工艺有恒速流加补料、恒底物浓 度流加补料、溶氧控制的脉冲流加补料等。恒速补 1．1 菌种 料工艺，发酵前期由于菌体代谢较强后期代谢减弱， 地衣芽孢杆菌 BacilluslichenfiormisCGMCC 因而导致前期糖浓度偏低后期偏高。恒糖浓度流 3336 加，由于残糖需要离线测定，导致糖浓度控制存在一 1．2 培养基组成 定的滞后性。溶氧控制补料工艺中，当溶氧高于设 一 级种子培养基 ( L)：酵母膏7，胰蛋 白胨 定值时补加糖液使溶氧下降到设定的范围 ]。然 10，葡萄糖 30，K2HPO4 ·H2O0．5，MgSO4·7H20 而本文所用菌株在发酵过程中，发酵液溶解氧的变 0．5，pH7．2±0．1。于 121oC灭菌20min。 化与残糖存在明显的关联性，因此根据溶氧补料不 二级种子培养基 (g／L)：葡萄糖 80，味精 80， 适用于本文所研究的 一PGA发酵。用pH控制底物 酵母膏20，NH4NO34．1，NaC110，CaC