斑点免疫金渗滤法定量测定血清淀粉样蛋白A方法的建立及性能评估.pdfVIP

检验医学2013年9月第28卷第9期 LaboratoryMedicine，September2013，Vol28．No9 ·835 文章编号：1673~640(2013)09-0835-06 中图分类号：R446．61 文献标志码 ：A DOI：i0．3969／j．issn．1673~640．2013．09．024 斑点免疫金渗滤法定量测定血清淀粉样蛋白A方法 的建立及性能评估 陈长强 ， 杨 晶 ， 顾志冬 ， 万颖蕾 ， 毛客 自 ， 冯晓静 ， 徐建新 ， 樊绮诗 (1．上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科，上海200025； 2．上海奥普生物医药有限公司研发中心，上海 201201) 摘要：目的 建立斑点免疫金渗滤法(DIGFA)定量测定血清淀粉样蛋白A(SAA)并评估其分析性能。方法 选用2株商品化抗 SAA单克隆抗体，分别结合于硝酸纤维素膜和胶体金 ，制备免疫金渗滤试剂板条 (SAA— DOT)以定量检测SAA。按照EP文件 ，评估SAA—DOT的分析性能(检测限、精密度、准确性、线性范围等)。结果 SAA—DOT最低检测限为5mg／L；10和 100mg／L的批内变异系数 (CV)分别为9．07％和 10．21％，天间CV分 别为 11．33％和 11．53％；线性范围为5—230mg／L；SAA—DOT的测定结果与商 品化乳胶增强速率散射 比浊法 (LERN)试剂具有 良好的相关性(r=0．995，P0．05)。表观健康者血清SAA浓度中位数为5．7mg／L，95％可信 区间为0—9．6mg／L。结论 基于DIGFA的SAA-DOT简便、快速 ，能在5min内完成检测 ，各项分析性能指标达 到国家食品药品监督管理局(SFDA)对体外诊断试剂的要求，可用于临床患者血清标本的检测。 关键词：斑点免疫金渗滤法 ；血清淀粉样蛋白A；即时检验；乳胶增强速率散射比浊法 Establishmentand performance evaluationsof dotinununo—gold filtration assay for thequantitative determinationofserum amyloidA CHEN Changqiang ，YANGJing ，GUZhidong ，WAN Yinglei。，MAO Kezi， FENGXiaojing，XUJianxin，FANQishi． (1．DepartmentofClinicalLaboratory，RuijinHospital，ShanghaiJiaotong UniversitySchoolofMedicine，Shanghai200025，China；2．ShanghaiUpperBio—TechPharmaCo．，Ltd．，Shanghai 201201，China) Abstract：Objective Toestablishadotimmuno-goldfiltrationassay(DIGFA)forthequantitativedetermination ofserumamyloidA (SAA)，andevaluateitsanalysisperfomrance．Methods SerumDIGFA—basedSAAdetection reagent(SAA-DOT)wasestablishedusing2anti-SAAmonoclonalantibodiesbeingcoatedwithnitrocellulosefilterand labeledbycolloidalgold，respectively．AccordingtoEPfiles，theSAA-DOTanalysisperfomrances(suchasdetection limit，precision，accuracy，linearrnage，eta1)wereevaluated．Results ThedetectionlimitofSAA—DOTwas5mg／L． Thewithin—mRcoefficientsofvariation(cv)were9．07％