气相色谱-质谱法分析膀胱癌患者尿液代谢组.pdfVIP

第36卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报 第9期 Chinese of 1257～1260 2008年9月 JournalAnalyticalChemistry 气相色谱．质谱法分析膀胱癌患者尿液代谢组 林云径 汪晋 王毅+ 瞿海斌 程翼宇 (浙江大学药物信息学研究所，杭州310058) 摘要建立了一种衍生化与气相色谱．质谱联用相结合的尿样代谢组分析方法。考察了样品预处理过程的 提取溶剂、样品衍生化方法和气相升温梯度等分析条件，最终选择了丙酮为提取溶剂，V(MSTFA)：V(TMCS)= 117．9％之间。本法已成功应用于膀胱癌患者与正常人的尿液代谢组学分析，发现4种潜在的生物标记物。 关键词气相色谱．质谱，代谢组学，膀胱癌 · 1 引 言 随着后基因时代的到来，代谢组学研究正在逐渐兴起，它是定量分析由病理生理刺激或基因改变而 引起的体内代谢物动态变化的--11学科¨．2】。代谢组学主要应用于疾病诊断、植物代谢、药理及毒理机 制研究等方面。通常通过分析病理生理状况下内源性代谢产物的变化，发现疾病的潜在生物标记物。疾 病患者体液的代谢组学研究对于寻找新的疾病生物标志物，辅助临床诊断和治疗具有重要的意义’4’。 处理简单等优势，而存在灵敏度低等缺点。Brindle等∞1等应用NMR技术对患有严重心脏冠状动脉疾 了正常人和患者。基于质谱(MS)的代谢组学分析主要采用液相色谱．质谱联用技术(LC／MS)和气相色 谱一质谱联用技术(GC／MS)。GC／MS因具有解析能力强、灵敏度高、拥有成熟的商业化的质谱数据库等 多方面优势，在代谢组研究中得到广泛的应用。Yu等【71利用GC／MS对乙肝患者以及正常人的血清进 行分析，不仅能较好地区分正常人和乙肝患者，还可以判断乙肝患者的患病程度。 GC／MS在代谢组分析中的主要对象包括血清、尿液等体液和组织匀浆液。这些生物样品在分析前 需要预处理。包括蛋白沉淀、代谢物提取等步骤。由于氨基酸、有机酸等重要的内源性代谢物挥发性较 弱，且具有热不稳定性，必须进行衍生化后才能运用GC／MS分析。本研究以膀胱癌病人尿样为分析对 象，对GC．MS分析过程中的各个实验步骤进行了分析条件优化，包括提取溶剂的选择，衍生化方法的选 择等。所建立的方法有望为基于GC／MS的代谢组学研究提供帮助。 2实验部分 2．1仪器与试剂 7683 有限公司)，葡萄糖、半乳糖(上海恒信化学试剂有限公司)，肌酐、葡萄糖醇(上海化学试剂有限公司)， 丙酮、乙腈、甲醇、H，PO。等其它试剂(分析纯，杭州试剂厂)。 2．2色谱质谱条件 mxO．25mm ZB一5MS色谱柱，30 xO．25岬；进样口温度270℃；无分流进样，进样量：2此；载气： 氦气；载气流速：1．0 min)_曼兰型_125℃(7min)』坚兰骂190℃(10min) mL／rain；柱始温85℃(5 2007-12-19收稿；2008-03-30接受 本文系国家自然科学基金(No和浙江省科技厅重大科技计划项目(NO．021103549)资助 ·Email：mysky@zju．edu．ell 万方数据 1258 分析化学 第36卷 !竺～00℃(5min)。 EI离子源：温度，230℃；电子能量，70eV；四级杆温度，150℃；全扫描模式，扫描范围 m／z60～600，扫描速度：2次／s。 2．3样品制备 g／L)，混合均匀后于37℃水浴 移取尿样200灿于1．5mL离心管中，加入20斗L脲酶水溶液(80 孵育2h以去除尿液中含有的尿素。孵育结束后加入20斗L内标(2g／L去氧胆酸溶液)以及400灿L丙 酮，涡旋lmin混匀，冰浴30min以达到提取内源性物质和沉淀蛋白的功效