噬菌体展示技术体内筛选小鼠肾脏特异性多肽.pdfVIP

医药~2008年8月第 10卷第4 · 论 著 · 噬菌体展示技术体 内筛选小鼠肾脏 特异性多肽 阳艳丽 ，王 自正 (1．东南大学附属 中大医院，江苏南京 210009；2．南京医科大学附属南京市第一医 院，江苏南京 21OOO6) [摘 要] 目的 利用噬菌体随机多肽文库对小鼠进行体 内筛选，获得小鼠肾脏血管特异性多肽。 方法 将噬菌体多肽文库经尾静脉注射人小鼠体 内，循环10min后进行心脏灌注，收获小鼠肾脏，经 过洗涤研磨后得到与肾脏血管特异性结合的噬菌体 ，该噬菌体体外扩增后被用于下一轮筛选 ，三轮筛 选后随机挑取24个阳性噬菌体克隆送测序，并分析这些序列之间的共同序列。结果 经过三轮筛选， 特异性结合于小鼠肾脏血管的噬菌体得到富集，测序结果显示多肽序列VSASYHR出现的概率最大 (62．5 )，其次为GQwGARG(25．O )。结论 利用噬菌体多肽文库对小鼠进行体 内筛选可以得到 小鼠肾脏血管特异性多肽。 [关键词] 噬菌体体 内展示；肾脏特异性多肽；多肽筛选；随机多肽文库 中图分类号 ： Q78 文献标识码 ： A 文章编号 ： 1672—271X(2008)04—0248—04 Selectingkidneyspecificpeptidesofmicebyphagedisplayin vivo． YANG Yan—li，WANGZi—zheng。 (1．ZhongdaHospitalAffiliatiedtoSoutheastUniversity，Nan- ring210009，Jiangsu，China；2．NanjingClinicalNuclearMedicineCenter，NanjingFirstHospital AffiliatiedtoNanjingMedicalUniversity，Nanjing210006，Jiangsu，China) [Abstract] Objective Selectingkidneyvascularspecificpeptidesofmiceinvivowithphagepeptide libraries．Methods Afterphagepeptidelibrarywasinjectedinmousebyintravenousinjectionand heartperfusionwascarriedoutafter10minutes，kidneywasharvested．Kidneyvascularspecificpep— tideswhichwereusedinthenextscreeningwereobtainedafterwashing，grindingandamplificationin vitro．Afterthreecirculations，DNAswereextractedfrom 24singleclonesandweresequenced．Se— quenceswereanalysedtodeterminethecollectivesequence．Results Afterthreecirculations，phages specifictokidne3rvascularwereenriched．Theresultofsequencing revealed thatVSASYHR was mostfrequent(62．5％)．NextwasGQWGARG (25．0 )．Conclusion Itisfeasibletoobtainkidney specificpeptideswithphagedisplayinvivo． [Keywords] Phagedisplayinvivo；Kidneyspecificpeptides；Peptidescreening；Randompeptideli— braries ． 噬菌体展示技术最早是在1985年由Smith等人 为肾脏病的靶 向诊断和治疗提供新的途径。 提出，它是一项将外源的重组肽、蛋白质包括抗体片