小儿铜绿假单胞菌感染对亚胺培南耐药性分析及机制探讨.pdfVIP

StraitPharmaceuticalJournalVol20No．102008 小儿铜绿假单胞菌感染对亚胺培南耐药性分析及机制探讨 叶建敏 (浙江省台州医院路桥院区儿科 台州 318050) 摘要：目的 探讨患儿铜绿假单胞菌感染对亚胺培南的耐药性及可能的作用机制。方法 取临床分离的铜绿假单胞菌亚胺培南耐药11株。 采用改 良三维试验方法检测ESBL5和AmpC酶。采用外膜蛋白图谱，紫外吸收法测定OprD2含量。采用Etest试验观察氰氟苯腙对亚胺培南 最低抑菌浓度(MIc)的影响，以研究细胞内主动外排泵出机制。结果 11株铜绿假单胞菌耐药株中检出单产ESBLs4株．单产Am pC酶3株， 其中同时产Am pC酶和ESBLs共 1株。耐药株OprD2相对含量明显低于敏感组(P0．01)。有27．3％菌株存在主动外排泵出机制。结论 超广谱 8内酰胺酶(ESBLs)和An1pC酶的产生、C’prD2的减少及存在主动外排泵出机制是我院住院患儿铜绿假单胞菌对亚胺培南抗生素耐药的 主要原 因。 关键词：铜绿假单胞菌；亚胺培南；耐药；ESBLs；Am pC酶；OprD2；主动外排 中图分类号 ：R969．3 文献标识码：B 文章编号：1006．3765(2008)．010．0117．02 铜绿假单胞菌是临床常见的医院感染病原菌，对多种抗 3Og头孢西丁纸片置于平皿中心，使用 自制刀片在离纸片边 生素具有固有耐药性，并在接触抗生索后可诱导产生多种机 缘 5ram处放射性地 由里 向外切割一道狭逢(15mm×lmm)， 制对原本敏感的抗生素产生耐药。亚胺培南作为革兰阴性菌 用微量加样器取 40止 酶粗提物 由里向外加入狭缝 内．尽量 的最有效的抗生素，随着其广泛应用，铜绿假单胞菌对亚胺培 避免酶液溢出狭缝。将培养基 35℃孵育过夜。若观察到狭 南的耐药菌株逐渐增多，给临床治疗带来困难。因此，研究耐 逢与抑菌圈交接处出现扩大的长菌区域，视为三维试验阳性， 亚胺培南铜绿假单胞菌感染的机制显得尤为重要。我们收集 即AmpC酶阳性。 ， 了我院两个院区住院患儿耐亚胺培南铜绿假单胞菌 11株。 1．3．3 ESBLs分析：按文献 1【]用30gg头孢曲松纸片取代头 我们从超广谱 内酰胺酶(ESBLs)和 AmpC酶的产生状况、 孢西丁，用36 的酶粗提液加上4L2x10~／mol·L 取代 细菌的外膜蛋 白OprD2及细胞 内主动外排泵出机制 3个方 40 酶粗提液，其余操作同1．3．2，若观察到狭逢与抑菌圈 面着手。研究其耐药机理，现报道如下： 交接处出现扩大的长菌区域，视为三维试验阳性，即ESBLs 1 材料与方法 阳性。 1．1 菌株来源 2000年 1月～2007年 1O月我院两个院区 1．4 外膜蛋白OprD2基因检测 从M—H琼脂平板上挑取单 住院患儿发生铜绿假单胞菌感染 78例。其中对亚胺培南耐药 个铜绿假单胞菌菌落到20mLLB肉汤中震荡培养 16h。分别 11株，男性8例，女性 3例，年龄6月～12岁，平均2．4岁。 取 1．5mL菌液转种到 30mLLB肉汤中，震荡培养 20h，7500r 标本来源为痰液 7份，切 口脓液 2份，尿液和脑脊液各 1份。 m·in 413离心 10min。用20mmo|·乙一pH7．0磷酸盐缓冲液 所有菌株都经用法国生物梅里埃公司的Vitek一32型全 自动微 (PBS)洗涤两次，置冰浴超声破菌，每 50s停 15s连续 5次。 生物分析仪、GNI+鉴定卡进行鉴定。 5000rm·in 4℃离心 15min，取上清液。将沉淀颗粒悬浮于 1．2 仪器及试剂 M—H琼脂培养基，LB肉汤培养基为Difi— 10reotol·L～pH7．0PBS中，室温作用 30min。悬液 30000r· co公司产品；亚胺培南药敏纸片为Oxiod公司产品；Vitek一32 min 室温离心30rain，弃上清。并用 1％十二烷基肌氨酸钠洗 型全 自动微生物分析仪及 GNI+细菌鉴定卡均为法国