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啤酒废酵母中生产
啤酒废酵母中生产SOD工艺 * . 啤酒废酵母中生产SOD工艺流程 酵母泥 洗涤 酵母培养基 灭菌 酵母菌复壮 SOD纯化 SOD提取 * 实验过程 一：废酵母的预处理 二：酵母的复壮培养 三：酵母中SOD的提取——异丙醇法 四：SOD纯化 * 酵母的预处理 (目的：得到较纯的酵母菌种） 混匀 废酵母泥+等量无菌冰水 80~100目筛 离心分离 摇匀静置3~4h 沉淀并注入无菌冰水 冰水漂洗1~2次 倾去上层悬浮液 直得上层清液无色 无味,酵母呈纯白色 * 酵母的复壮 指在菌种的生产性能尚未衰退前，进行纯种分离和生产性能的工作，以期菌种的生产性能逐步有所提高。 121℃灭菌20min 酵母培养基 恒温摇床培养 （28℃140r/min2h) 目的：扩大培养以得到含SOD湿菌体 30%接种量接入经过洗涤后的酵母 * 酵母中SOD的提取——异丙醇法 1g酵母湿细胞 浸泡120min， 加入9ml异丙醇 抽滤除去溶剂 SOD 搅拌120min 加入3倍体积的50粗提液 离心除去菌体 mol/l磷酸钾缓冲液 （PH7.0） 目的：利用异丙醇法酵母内SOD，并初步除去细胞壁、细胞器等。 * SOD纯化过程 用2mol/l HCL SOD粗液 调节PH至5.0 加入丙酮搅拌摇匀 离心（5000r/min) 上清液 调PH4.0 加入丙酮二次沉淀离心（5000r/min) SOD纯化产品 目的：利用丙酮在不同PH之下对其他蛋白质 和SOD的沉淀作用不同，得到SOD纯 化产品 * 注意事项 丙酮分级沉淀操作时，宜在4~10℃条件下进行，有利于提高蛋白质的沉淀效果，保护酶活性。 提取SOD后酵母残渣及杂蛋白可考虑加工为饲料或饲料蛋白添加剂，真正达到清洁生产的目的。 为降低成本，异丙醇均可考虑回收浓缩循环使用。 SOD活性测定采用改进的微量邻苯酚自氧化法。 * 工艺优点 采用异丙醇破壁、丙酮二次纯化提取SOD生产工艺，可得到SOD产品，且酶比活达3050.2u/mg.胞内SOD纯化提取的老工艺一般要经过细胞破碎、离心、盐析、透析、离子交换层析、凝胶层析五至六个步骤，才能达到酶比活大于3000u/mg的水平。因此该工艺步骤少，设备少，操作简单，成本低。 *
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