与花椰菜(Brassica oleracea ssp.botrytis)抗黑腐病基因连锁的RAPD标记.pdfVIP

No 第3s卷第1期 南开大学学报(自然科学) V01．35 200z年3月 Af地5ffP“rf口r“卅NdfⅣm打“mr，删洲地njN口如ff月s” Mar．2002 i研究简报l 讳_十_十十十疗 文章编号：0465—7942(2002)02一O】2603 基因连锁的RAPD标记 刘 松1 宋文芹1 赵前程2 陈成彬1孙德岭2陈瑞阳1 2．天津市蔬菜研究所，天津．300381) ．南开大学生物系．天津，300。71 摘 要 nf盯删n 利用RAPD技术，在花椰菜(B，n跚rdssp．6州删挑)抗感黑腐病的近等位基因系之间进行10碱基随 机引物的筛选．34j条RAPn引物扩增的产物表明，有7条引物在近等基因系中呈多态性．进一步的重复实验表 明，只有引物0Pm能够产生稳定的多态性．为了确定扩增产物OP川／1600与抗黑腐病基因的连锁程度，利用Fz 分离群体进行检测．结果表明：花椰菜种质c712抗黑腐病生理种BJ的抗性由一对显性基因控制．RAPD标记 0PⅢ／1600与抗病基因连锁，其遗传距离为(4．5±1．37)cM． 关t词：花椰菜；黑腐病}近等位基因系；RAPD 中圈分类号：Q75 文献标识码：A 黑腐病(blackrot)是由黑腐病黄单胞菌[x日n聃omo”d5 病害．黑腐病黄单胞菌属有5个种．其中x．rn”妒Ⅲ一s变种繁多，而花椰菜黑腐病抗性具有遗传多样性，这 些都严重阻滞抗性种质资源的大规模发展。“．利用分子标记技术对主教基因控制的病害表理进行筛选，已 成为一种稳定可靠的选择方法．目前．研究目标性状的连锁分子标记多采用近等位基因系(nearisogen-c一 1ines，NILs)和群组分析法(bulked segregant 导人另一农艺性状良好的栽培品种中。然后进行连续6～8次的回交和性状筛选，将选择到的所需基因型 再自交即可确定目的性状的纯台子，最终得到的一对基因型(回归亲本和NIL)．它们之间除目的位点外， 效的方法。…． 本文用稳定抗性资源c71 基因连锁的分子标记，并在F。代分离群体中作进一步测试以检查连锁强度． 花椰菜苗期抗黑腐病的鉴定 2和c731，其中c73l为回归亲本．c712是供 本实验所用材料为一对花椰菜抗黑腐病近等基因系c7l 表明．c71 天津市农业科学院蔬菜研究所． c，肉汁胨液体振荡 所有菌种为黄单胞菌，采自发病田问，经鉴定为北京致病变种BJ．供试菌种在27 播种出苗后，移植到装有灭菌土的营养钵内．当第三和第四片真叶完全展开时，用灭菌的医用剪沾取接种 收稿日期：200l—04—29 基金项目：天津市重点基金 作者简介：刘松(1976一J，男，河北邯郸人，硕士研究牛 第1期 刘 松等：与花椰菜(矗阳盯r∞毗r叭P“ssp60r，叫¨)抗黑腐病基因连锁的RAJ，D标记 ·127· 物在完全展开的叶片尖端·垂直于主脉剪掉o．j～Icm，每剪一次沾取一次菌液，调查后计算病情指数，按 群体抗病标准确定抗病类型． RAPD分析 引物序列为57一TcTccGGTAT一3 7．RAPD分析的反应体系为2j扯I。，含有2．5ftLl Tri 20mmol／L 0mmol HCl(pH8．0)，50mmol／L KCl)，2．5pL MgCl2，0．5p