菩人丹对T2DM大鼠胰腺微循环和β细胞分泌功能的影响研究.pdfVIP

摘 要 目的： 对比研究正常大鼠和2型糖尿病大鼠胰腺微循环与胰岛内分泌细 胞形态及分泌功能的关系，揭示“益气养阴，化瘀通络”之菩人丹超微 粉改善胰腺微循环修复受损胰岛B细胞形态与功能的作用机制，为临 床从胰腺微循环改善角度治疗2型糖尿病提供实验依据。 方法： 1．T2DM胰岛微血管损伤模型的建立：选用雄性Wistar大鼠，每 日灌胃自制的脂肪乳，连续4周后，眶静脉取血，离心血清，测定血 清胰岛素及空腹血糖值。正糖钳实验结合胰岛素敏感指数判定胰岛素 抵抗程度，之后尾静脉快速注射链脲佐菌素，一周后眶静脉取血，测 流成像仪检测胰腺组织血流量，随机抽取部分实验动物作相应病理观 察。 2．选出成模大鼠随机分组，分别给与相应药物治疗4周后： (1)胰腺微血管铸型重建：观察实验组动物胰岛微血管的三维 立体构筑特征、胰岛微循环引流通道的长度、管径以及与腺泡毛细血 管网的联系特性。 (2)胰组织血流量检测：激光多普勒血流成像仪观测胰腺局部 微循环状态。 (3)双重免疫组织化学染色：观察胰岛Q、13细胞的形态、数 量和分布； (4)透射电镜：观察胰腺组织的超微结构 (5)葡萄糖．胰岛素释放试验：评价胰岛B细胞的分泌功能。 结果： 1．模型复制结果表现为： (1)出现典型的“三多一少症状，即多饮、多食、多尿和体 重减轻。 (2)空腹血糖：FBG≥11．1mmol／L。 (3)甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白水平显著升高(PO．01， P0．05)。 (4)胰岛13细胞分泌功能降低，出现胰岛素抵抗。 (5)胰岛内分泌细胞表现为：胰岛形态不规则，周界与外分泌 部边界不清，胰岛内分泌细胞数量减少，形态异常。胰岛a细胞增生， 分布由周边向中央扩散。p细胞数量减少，细胞萎缩，甚至凋亡，分 布由中央向周边移位。 (6)胰腺组织血流量及胰岛微血管表现为：胰组织血流量显著 减少(PO．01，P0．05)；胰腺小叶间动脉壁增厚，出现纤维样病变， 周围小血管增生。 2．菩人丹对T2DM大鼠胰腺微循环及胰岛内分泌细胞的影响： (1)胰腺微血管铸型情况：模型组实验大鼠微血管数量明显减 少，微血管多表现为突然变细的盲端，微血管间的吻合减少，残存微 血管长度变短，管径变细；菩人丹治疗组，胰腺微血管数量增多，长 度、管径均显著增大。 (2)胰组织血流量变化情况：模型组胰血流量明显低于空白组； 菩人丹干预治疗组胰腺组织血流量较模型组显著增大(PO．05)。 (3)胰岛内分泌细胞变化情况：胰岛Q细胞染色呈红色，胰岛 中央13细胞染色呈黄色。正常对照组t13细胞数量较多，细胞均匀、 饱满；模型组：Q细胞由周边向中央移位。13细胞减少，细胞固缩， 由中央向周边移位；菩人丹治疗组：13细胞数量较模型组增多，B细 胞分布均匀、饱满。 (4)透射电镜观察胰岛13细胞超微结构： ①模型组：细胞核固缩变小，核仁模糊，异染色质边集；线粒体 肿胀，嵴结构减少甚至消失，嵴粒脱落；分泌颗粒形状不规则，电子 密度小，出现大量空泡化颗粒(无芯现象)。 ②菩人丹治疗组：细胞核近似圆形，核仁清晰，异染色质未出现 边集情况；线粒体及内质网形状及结构完整，嵴结构形成；分泌颗粒 形状规则、内容物饱满，电子密度大。 (5)胰岛13细胞分泌功能变化情况： ①模型组胰岛素的第一时相分泌峰出现在30min左右，滞后严 重，且胰岛素分泌量较少；第二时相分泌峰几不可见；血糖值降低缓 慢，处于高血糖状态。菩人丹治疗组各时相分泌峰基本符合胰岛素短 脉冲和长脉冲的双峰分泌模型，且胰岛素分泌量较多。 ②与模型组相比，菩人丹治疗组的Ins．AUC／Glu．AUC显著增大。 ⑧模型组胰岛13细胞功能评估相关指数较空白组显著降低。与模 型组相比，菩人丹治疗组：胰岛素分泌增加，胰岛13细胞功能指数提 高，胰岛素敏感指数有所提高，受损的胰岛13细胞分泌功能有所改善。 结论： 1．灌胃脂肪乳并运用尾静脉快速推注链脲佐菌素复制2型糖尿 病胰岛微血管损伤模型，稳定性和可重复性好，为理想模型。 2．菩人丹超微粉可显著改善2型糖尿病微血管损伤大鼠胰腺微 循环状态。