小米酒之制作.DOC

Experiment9微生物生長曲線之測定 實驗目的: 測定為生物生長曲線的方法 了解典型微生物生長曲線的四個時期(遲滯期、對數期、穩定期與死滅期)所代表的意義 學習分光光度計的測定原理與實驗步驟 實驗原理: 利用光電比色計以595 nm波長，通過含有細菌之懸浮液，測其吸收 率或折射率，再與已知之標準濃度比較。其基本原理為細菌體可視為 一「懸浮膠體（colloid）」，當光線通過此液體後，膠體粒子可將光線 折射，而在某一範圍內，光被吸收或折射的量與膠體濃度呈線性關 係。唯此方法估算的是死菌與活菌加起來的總數。 ＜微生物之生長曲線 以菌數和時間作圖在批次培養情形下，可以菌數和時間作圖，得生長曲線。 實驗以批次培養方式進行 遲滯期(lag phase): 由於接種的微生物正在適應新的環境，細胞吸收養分，代謝加速，此時微生物細胞增大，但未進行分裂，故數目沒有明顯變化。 對數期(logarithmic phase): 此期微生物已適應新環境，故會以均勻且迅速的速率進行分裂繁殖，數目呈幾何級數增加至最大數目，為微生物實驗最佳時期。 穩定期(stationary phase): 由於微生物大量繁殖使得密閉環境的微生物數量大量增加，產生的毒物、代謝產物增多，營養物質則大量減少，生長已達飽和，繁殖速率與死亡速率相等，維持在最大數目，生長曲線呈平行趨勢。 死滅期(death phase): 由於生存空間不足，養分消耗殆盡，毒性代謝物產量持續增加，微生物進行內呼吸代謝、自體分解，以極快速率死亡。死亡速率大於繁殖速率，生產取線呈下降趨勢。 ↑原液 　　 ↑培養20分鐘之後 ↑培養40分鐘之後 ↑培養60分鐘之後 ↑培養80分鐘之後 ↑培養100分鐘之後 實驗討論： 可能未確實的做好十倍稀釋，導致實驗的誤差，塗碟時可能吸取菌液不均勻，造成菌數超過３０～３００個菌落數，改進辦法應當在塗碟時均勻試管內的菌液， 確實做好塗碟步驟，能把不必要的人為誤差降至最小。 問題討論: 說明各組實驗結果(包刮數據與圖形)之生長曲線進行至哪一期，此圖形有何意義？ 　 0~40分：　分： 　80~100分： 我們的遲滯期不明顯，對數期與穩定期也差異不大，可能使操作流程中，人為的誤差所導。 理想結果: 遲滯期→對數期→穩定期→死滅期(到達了死滅期!!!!) 此圖形讓我們知道微生物的成長，也讓我們了解微生物在密閉空間中的生長情況分成四期。 說明各組生長曲線的適應期有多長？為什麼此一時期的吸光值沒有顯著增加？若此時期所得的吸光值成不規則上下跳動，應如何解釋？ 以我們的實驗結果，遲滯期(20分鐘)，對數期(20分鐘)，穩定期(40分鐘)，死滅期(20分鐘)。 因為密閉空間微生物大量增加，代謝物增多，營養物子大量減少，微生物生存空間開始不足，在代謝物增加，營養物質減少的情況下，其生長已達飽和狀態，所以微生物不再增加，反而呈現穩定狀態。 若吸光值變成不規則上下跳，我想不是吸光光譜儀壞掉，不然就是忘記校正吧，要不然就是菌液受到其他因素的影響，導致實驗數據錯誤。 測定微生物的生長曲線在微生物學上有何意義？ 將菌種培養在上面，然後測出他們的生長曲線時，就可以知道他們的生長情況，根據生長的情況可以知道某環境因子對微生物的影響。 說明分光光度計的測定原理與實驗步驟。 原理： 利用光電比色計以595 nm波長，通過含有細菌之懸浮液，測其吸收率或折射率，再與已知之標準濃度比較。其基本原理為細菌體可視為一「懸浮膠體（colloid）」，當光線通過此液體後，膠體粒子可將光線折射，而在某一範圍內，光被吸收或折射的量與膠體濃度呈線性關係。唯此方法估算的是死菌與活菌加起來的總數。 OD =Optical Density (光密度) ???? =Absorbance (A) (吸光值) ???? = 1og（1／transmittance) 心得: 4980N006 楊儀佳 實驗雖然只是過程，但是卻是精華所在，操作步驟的重覆，讓我們可以多加練習， 也在此從中找到問題的所在點，經由討論，可以更確實的了解，這對發問的人與 回答問題的人，可以提升能力，大家的分工合作，學到的不只是課程實驗，而是 最寶貴的經驗。 4980N034 蕭于琳 這次的實驗步驟雖然不多但是一直在重複，剛開始一個失誤做錯了，但沒關係只 是個開始，立馬重新來過，本來這個實驗就一直在重複動作及測吸光值，這回因 為錯誤又多了一次，不間斷的等待每個20分鐘的度過，力氣與精神都消耗在這 次的實驗上，真的是很花時間的一個實驗。 4980N0