1例雏鸭肝炎病毒和鸭圆环病毒混合感染的诊治.pdfVIP

· 88 · AnimalHusbandry VeterinaryMedicine 2008 Vo1．40 No．11 1例雏鸭肝炎病毒和鸭圆环病毒混合感染的诊治 李 威，李学奇，何金箭 (辽宁省葫芦岛市连山区金星动物防疫监督所，辽宁 葫芦岛 125018) 摘要：葫芦岛市某养鸭场樱桃谷肉鸭发生疑似雏鸭肝炎急性死亡病例。为了确诊病因，选取具有典型发病症状和病变的病鸭进行病原分离和鉴 定，结果通过细菌的分离和攻毒试验排除了细菌感染为主要病因的可能；应用RT—PCR和PCR检测典型病变样品，结合扩增基因的测序，确诊发 病鸭发生鸭肝炎病毒和鸭圆环病毒的混合感染。紧急应用鸭肝炎高免血清后发病鸭群死亡率得到有效控制，但存活鸭群中约有 10％的雏鸭表现生 长迟缓、消瘦，与鸭圆环病毒的感染症状相似。鸭圆环病毒是近年来新发现的一种病原，可导致感染鸭的免疫抑制，诱发混合感染，目前相关研 究较少，值得关注。 关键词：樱桃谷肉鸭；鸭肝炎病毒；鸭圆环病毒；混合感染；诊治 中图分类号：$858．32 文献标识码：B 文章编号：0529—5130(2008)11—0088—03 2007年4月，葫芦岛市某养鸭场饲养的4000多 1．3 病毒检测 只樱桃谷肉鸭从6日龄开始部分出现精神不振、羽毛 1．3．1 病料处理 发暗、有污脏，采食量减少，并有零星死亡。9日龄 取典型病变的肝、脾 、法氏囊和肾，用研磨器匀 突然发生50多只雏鸭死亡，发病鸭病程急、死亡快， 浆后，冻融3次。12000r／min离心5rain，取上清 大多死前头仰脚蹬，全身抽搐，部分鸭群打堆、眼半 备用。 闭、缩颈、羽毛篷松，少数拉黄 白色稀粪。剖检病理 1．3．2 RT．PCR检测雏鸭肝炎病毒 特征主要是肝脏肿大、大面积点状出血、有淤血斑或 根据 GenBank公布的 1型鸭病毒性肝炎病毒 土黄斑，胆汁少且稀薄色淡。脾脏斑驳状，肿大或萎 (duckhepatitisvirus，DHV)序列 (NC008250)设计 缩。肾脏大多肿胀出血。法氏囊 内淡黄色渗出物，黏 引物，上游引物为：5-GAccTcCAAG1丫rccAGAC．3； 膜有出血。至送检当 日 (12日龄) 已死亡600多只。 下游引物为：5一TFCGCAGAAGTGACAATC-3，扩增 我们对送检的病鸭进行实验室诊断，现将诊治结果报 的目的条带为453bp。采用 Tfizol等试剂提取总 告如下。 RNA，进行RT．PCR扩增，RT条件为：65℃5min， 37℃50min，70℃10min；PCR扩增参数为：94℃ 1 材料与方法 5min；94℃45S，47℃45S，72oC45S，30个循 1．1 材料 环；72℃ 10min。1．2％琼脂糖凝胶 电泳观察扩增 血琼脂平板、LB培养基、革兰氏染液和琼脂糖 结果 。 为杭州天和公司产品，病毒 RNA提取试剂 Trizol为 1．3．3 PCR检测鸭圆环病毒 invitrogen公司产品，病毒 DNA提取试剂盒 Universal 根据GenBank公布的鸭圆环病毒 (duckcircovir- GenomicDNAExtractionKit、反转录酶M-MLV、RNA HS， DCV)序列 (AY228555)设计引物，上游引物 酶抑制剂、PCR扩增试剂盒、DNA胶 回收试剂盒、 为：5一TGcCGCCCIrrGAAGAGTC．3；下 游 引物 为 ： 和 pMD．18T载体试剂盒、DH5a感受态细菌均 为 5．1TrcccGAGrAAccGTCCC．3，扩增的 目的条带为 TaKaRa公司产品，其他试剂均为分析纯。1日龄健 404bp。应用 U