相色谱法测奶制品中的防腐剂含量.ppt

主讲人：马静 班级：食品2班 学号： 02 * 主要内容 * 实验背景 食品防腐剂可以抑制食品中的微生物的繁殖或杀灭食品中的微生物，苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钠盐是常用的食品防腐剂。但如果添加过量，会破坏食品中的营养成分，不仅能破坏维生素B1 ,还能使钙形成不溶性物质,影响人体对钙的吸收,同时对人的胃肠有刺激作用,过量食用还可引发癌症。苯甲酸的毒性远远大于山梨酸,但因苯甲酸在酸性条件下抑菌范围广,以及价格低廉,仍作为主要防腐剂加入到食品中。但是苯甲酸是不允许在乳制品中添加的。然而近年来中国奶制品大多被检出苯甲酸，虽然含量不高，但足以影响婴儿等特殊人群的健康。 * 性状与性能 山梨酸 苯甲酸 无色晶体粉末，相对分子质量为：112.13，熔点132～135℃，沸点228℃，耐光耐热性好，难溶于水，溶于乙醇，乙醚，花生油和丙酮。 白色晶体，相对分子质量为144.11，熔点121.7℃，沸点249.2℃，常温下难溶于水，溶于热水，乙醇，氯仿，乙醚，丙酮，二硫化碳等。 * 食品中测定防腐剂方法的比较 * 食品中测定防腐剂方法的选择 检测苯甲酸和山梨酸一般采用薄层色谱法、气相色谱法和液相色谱法。薄层色谱法是一种定性半定量的测定方法，虽然灵敏度高但重现性差。气相色谱样品处理工作量大、试剂毒性强，且该方法由于填充柱的吸附及柱效能差别较大，使标准系列线性差，最低检出限较高。对于含量低或稀释倍数大的样品无法检测，而液相色谱法样品处理相对简单。另外，高效液相色谱因采用高压输液泵和小颗粒的填料，与经典的液相色谱相比具有很高的柱效和分离能力。故本实验采用高效液相色谱法测定防腐剂的含量。 * 高效液相法的测定过程 * 仪器及试剂 仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器）微量进样器（100um） 超声波发生器;溶剂过滤器;0.45 μm滤膜;容量瓶;恒温水浴锅 试剂：液态奶饮料；奶粉；甲醇（色谱纯）；稀氨水（1:1） 氢氧化钠溶液（0.1mol/L）;亚铁氰化钾溶液（0.2mol/L） 醋酸锌溶液；磷酸盐缓冲溶液；标准贮备液：苯甲酸(1mg/mL),山梨酸（1mg/mL）;混合标准工作液（苯甲酸+山梨酸）0.2mg/mL * 山梨酸、苯甲酸的提取 * 液相色谱条件 柱子:Eclipse XD13-C18柱(4.6mm×150mm，5μm) ; 流动相:磷酸盐缓冲溶液 - 甲醇(V/V90:10) ; 等梯度洗脱; 流速 0.3ml/min; 保留时间 15min; 柱温 35 ℃; 进样量 20 ul; 紫外检测波长 227nm； * 实验步骤 1.混合标准液的配置 分别移取混合标准工作0.00ml,1.00ml,2.00ml,3.00ml, 4.00ml,5.00ml,5.00ml于6个容量瓶（10ml），稀释定容。 2.流动相处理 流动相用0.45 um水相滤膜进行减压过滤和超声脱气处理 3.开机 出现平直基线 进样 4.定性分析 分别进苯甲酸,山梨酸标准溶液10uL,确定各个峰保留时间 5.标准曲线测定 分别吸取60uL的苯甲酸和山梨酸混合标准液进样，建立定量分析表 6.样品分析 取样品60uL进样，记录保留时间和峰面积 * 标准色谱图 * 液相色谱仪使用注意事项 (1)使用高效液相色谱级的溶剂与试剂，溶剂和水必须进行过滤。 (2)必须对含有缓冲盐的流动相进行过滤（0.45um）。 (3)流动相使用前必须脱气。 (4)改变流动相时防止交叉污染。 (5)不要使用陈旧的流动相，定期清洗流动相储液瓶。 (6)定期清洗烧结不锈钢吸滤头。 (7)防止过高压力冲击色谱柱。 (8)每次使用后要冲洗干净进样阀中残留的样品和缓冲盐，防止无机盐沉积和样品微粒磨损阀转子。 (9)严禁使用气相色谱那样的尖头针进样。 (10)在注射针前加装针式过滤器，防止样品中的微粒进入进样阀 (11)色谱柱不用卸下前:a.必须洗去缓冲液；b.防止产生微生物； c.用大于10%的有机溶剂充满整个色谱柱；d.柱卸下后用柱堵头将色谱柱首尾密封。 * 参考文献 1.祝伟霞,魏蔚,杨冀州,刘亚风《高效液相色谱法测定乳饮料和奶制品中苯甲酸和山梨酸》,中国国境卫生检疫杂志,2005年10月第28卷第5期 　 2.周毅刚,龙苏,王晓春,等.高效液相法测定食品中苯甲酸和山梨酸含量.中国医师杂志,2001,13(3) :184-188 3.全国标准化委员会.GB/T5009.29-2003食品中山梨酸、苹甲酸测测定方法.北京:中国标准出版社,2003 * The End *