境工程微生物学实验顾彦1.pptVIP

落菌法 (1)将肉汤蛋白胨琼脂培养基、查氏琼脂培养基、高氏一号琼脂培养基溶化后，各倒十五个平板，冷凝。 （2）在一定面积的房间内，按下图的5点所示，每种培养基每个点放三个平板，打开皿盖，暴露于空气中30分钟或60分钟后盖上盖子。 （3）肉膏蛋白胨平板于37℃，倒置培养1天；查氏琼脂平板和高氏一号琼脂平板倒置于28℃培养分别培养24~48h各自计算其菌落数，观察菌落形态、颜色。 实验步骤 * X X X X X 测定空气微生物的5点采样法 * （4）计算每m3空气中微生物的数量。 奥梅梁斯基曾建议：面积为100cm2的平板培养基，暴露在空气中5分钟相当于10升空气中的细菌数。 奥氏公式： 5 t 100 A 1000 10 × N × × C = 式中：C—空气细菌数； A——捕集面积，cm2 ； t ——暴露时间，min； N——菌落数，个。 * 根据落菌法，记录空气中微生物的种类和相对数量，填写下表，推算出1m3空气中细菌数。 空气微生物的测定结果 观察结果与计算 * (一)稀释平板法 1. 取样 用无菌锥形瓶到现场取一定量的湖水，迅速带回实验室。 2. 稀释水样 将1瓶90mL和5管9mL无菌水排列好，用记号笔依次编上10－1、 10－2、10－3、10－4、10－5、10－6。在无菌操作条件下，用10mL的无菌移液管吸取10mL水样(或其它样品)加入编号为10－1无菌水(内含玻璃珠)中，将移液管吹洗三次，用手摇10min将颗粒状样品打散。即为10－1浓度的菌液。用1mL无菌移液管吸取1mL 10－1浓度的菌液于编号为10－2无菌水中，将移液管吹洗三次，摇匀即为10－2浓度菌液。同样方法，依次稀释到10－6 。 * 稀释液的制备 10mL试样 90mL蒸馏水 * 3. 平板的制作 ① 取10套无菌培养皿编号， 10－4、10－5、10－6各3个，另一个为空气对照。 ② 取1支1mL无菌移液管从浓度小的菌液开始，以10－6、10－5、10－4为序分别吸取0.5mL菌液于相应编号的培养皿内(每次吸取前，用移液管在菌液中吹泡使菌液充分混匀)。 * ③ 加热培养基，当其冷至45℃左右时，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拿培养皿，以中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖，靠近火焰，将皿盖掀开，倒入培养基后将培养皿平放在桌上，顺时针和逆时针来回转动培养皿，使培养基和菌液充分混匀，冷凝后即成平板，倒置于30℃培养24～48h，然后观察结果。 a:皿法 b:倒平板 * ④ 取对照无菌培养皿，倒平板待凝固后，打开皿盖10min后盖上，倒置于30℃培养24～48h，然后观察结果。 * （二）平板划线法 1. 平板制作：将融化并冷至约50℃的肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌培养皿内，使凝固成平板。 2. 划线：用接种环挑取一环样品，左手拿培养皿，中指、无名指和小指托住皿底，拇指和食指夹住皿盖，将培养皿稍倾斜，左手拇指和食指将皿盖掀半开，右手将接种环伸入培养皿内，在平板上轻轻划线(切勿划破培养基)。划线完毕盖好皿盖，30℃培养24～48h后观察结果。 * 平板划线分离的划线方法 左：连续划线法（1，2依次划线的起点）右：分区划线法（1，2，3，4依次划线的起点） * 二、细菌的接种技术 接种方法：常用的有斜面接种法、平板接种法、液体接种法、试管深层固体培养基的穿刺接种法。 接种工具：常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等。 * （一）斜面接种法 ① 左手平托两支试管，拇指压住两支试管。外侧是菌种试管，内侧是待接种的空白斜面(两支试管的斜面同时向上) 。右手将棉塞旋松，以便在接种时容易拔出。 ② 右手拿接种环，在火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部位也过火灭菌。 ③ 将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指、无名指和手掌将两支试管的棉塞一并夹住拔出，棉塞仍夹在手中，然后让试管口缓缓过火焰。 1 2 3 * ④ 将已灼烧过的接种环伸入菌种试管内。先冷却，而后再用环挑取少许菌种，将接种环抽出并迅速伸入待接种试管底部，在斜面上由底部向上划线。抽出接种环，塞上棉塞将试管插在试管架上，最后再次烧红接种环，则接种完毕。 4 5 6 7 8 * （二）液体