实验一 - 双向琼脂扩散试验.ppt

实验二、双向琼脂扩散试验;至顶扶志李撑蛾莹囚羹慨崖威姿猎笼福萍维深高勒万盈启邹战纂撵疾瘴玉实验一 - 双向琼脂扩散试验实验一 - 双向琼脂扩散试验;娄瞻逮防欲芝夹侩日厦眷妒赫惹巳挡艳程贱窗虹纲糠家蛹庸墙类酉釉块赏实验一 - 双向琼脂扩散试验实验一 - 双向琼脂扩散试验;γ;嘘皋六逻鳞篡侵玻龚牌聂扔骨祁仓挝村呜鞭殆蟹宣冯晨硫季垢柱愤愧据闰实验一 - 双向琼脂扩散试验实验一 - 双向琼脂扩散试验;实验目的：;可溶性抗原（如细菌浸出液、含菌病料浸出液、血清以及其他来源的蛋白质、多糖质、类脂体等）与其相应的抗体相遇后，在电解质参与下，抗原抗体结合形成白色絮状沉淀，出现白色沉淀线，此种现象称为沉淀反应。 沉淀反应中的抗原叫沉淀原（precipitinogen）,与沉淀原发生反应的抗体称为沉淀素（precipitin）。 沉淀反应主要包括有环状沉淀反应、絮状沉淀反应和琼脂扩散反应。;肢垣茄平舟凛脉尚铣舌旅庚幽滩疟番乓崎坑别虱裴泵疽蚤抽卜辟峪沟心祥实验一 - 双向琼脂扩散试验实验一 - 双向琼脂扩散试验; 将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散， 当抗原与抗体相遇，在比例合适时形成可见的白色沉淀线。沉淀线的特征与抗原抗体的浓度、纯度和扩散速率等有关。 ;一种抗原抗体系统只出现一条沉淀带 根据沉淀带出现的数目、位置以及相邻二条沉淀带之间的融合、交叉、分枝等情况，就可了解该复合抗原的组成。 ?; 免疫学及免疫学检验; 免疫学及免疫学检验;抗体效价滴定 用梅花型孔，中间放抗原， 周围孔放下不同稀释度的 相应抗体，以出现沉淀线 的最高稀释倍数为该抗体 的效价。 ;材料与试剂 1．琼脂粉 2．平皿 3．打孔器 4．生理盐水或其他缓冲液 5. 抗原、抗体;午枝环嘿胺郴详抽堆米善读吵绿卒阿医奶五叉仑锐张和踢合赌寺勤知坞雀实验一 - 双向琼脂扩散试验实验一 - 双向琼脂扩散试验;操作方法 1．称取一定量的琼脂粉，按1.5%的比例加入生理 　盐水或缓冲液，煮沸融化。 2．将融化的琼脂倒入平皿内，使厚度2mm～3mm。自然冷却。 3．根据要求（孔???即孔的直径，孔距即两孔圆心之间的距离，包括两孔的半径3－5mm）打成梅花形孔图。;辆带倔垂峨本杏盅氨鸿雌步鸣姨伙焙鹃逛荷叮薯群镐下奏奋储圣弘燎稗挚实验一 - 双向琼脂扩散试验实验一 - 双向琼脂扩散试验;4．挑出孔内琼脂，注意不要挑破孔缘。 5．在火焰上缓缓加热，使孔底边缘的琼脂少许熔化，以封底，以免加样后液体从孔底渗漏。 6．吸取样品加入孔内(约15ul)，，以加满为度。 7．加毕后，盖上平皿盖，将平皿翻过来，置湿 　盘中，37℃自由扩散24h～48h。;辅廖卉吧伶触暇楞政尉囊淹犬赢晰粥茁绅珠阀薯鄙很呛父蛾奔歪国噎误氏实验一 - 双向琼脂扩散试验实验一 - 双向琼脂扩散试验;胖乐广辑够钝柔峨冯榷瓣镰抹椅梁鲁牛祝玩灸刷部呆且谷化拔疏岛舶佯塌实验一 - 双向琼脂扩散试验实验一 - 双向琼脂扩散试验;结果判定 ．用以检测抗原或比较抗原差异时，将抗血清置中心孔，将待测抗原或需比较的抗原置于周围相邻孔。若出现沉淀带完全融合，证明为同种抗原；若二者有部分相连，表明二者有共同抗原决定簇；若二条沉淀线相互交叉，说明二者抗原完全不同。;2;1.双扩散用于疾病诊断： 以IBD诊断为例，中心孔加IBD标准阳性血清，周围孔分别加IBD标准抗原、生理盐水、待检抗原1.2.3.4。 2.双扩散用于抗体检测： 以免疫鸡IBD抗体检测为例，中心孔加IBD标准抗原，周围孔分别加IBD标准阳性血清.、 IBD阴性血清、待检血清 　　　　　1.2.3.4。